【摘 要】
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背景与目的：靶向药物治疗(targeted drug therapy)逐渐成为是目前肿瘤治疗的重要手段.近年来的研究发现,磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)是抗肿瘤治疗的重要靶点之一.膜联蛋白B1(annexin B1)是孙树汉教授克隆的一个新的膜联蛋白(Annexins)亚家族成员,对PS的结合具有很高的亲和力和特异性.蜂毒肽(melittin,MLT)是蜂毒的主要成分,
【机 构】
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第二军医大学医学遗传学教研室,上海,200433
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背景与目的：靶向药物治疗(targeted drug therapy)逐渐成为是目前肿瘤治疗的重要手段.近年来的研究发现,磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)是抗肿瘤治疗的重要靶点之一.膜联蛋白B1(annexin B1)是孙树汉教授克隆的一个新的膜联蛋白(Annexins)亚家族成员,对PS的结合具有很高的亲和力和特异性.蜂毒肽(melittin,MLT)是蜂毒的主要成分,具有很强的抗肿瘤作用.以肿瘤内皮细胞暴露的磷脂酰丝氨酸为"靶",以AnxB1为"导向分子",以蜂毒素为"抗肿瘤分子",构建基因工程靶向抗肿瘤药物mAnxB1-ML.方法：利用PCR重叠区延伸法连接AnxB 1-MLT,融合基因克隆至pGEX5T融合表达载体和pET-28a表达载体,转染大肠杆菌,分别就IPTG浓度、利福平、表达温度等条件进行优化.结果：融合蛋白AnxB1-MLT在pET-28a表达载体中无明显表达条带.37℃条件下,pGEX-5T表达质粒中高效表达,表达产物占菌体总蛋白的40％以上；IPTG、利福平对表达影响较小,但表达产物均为包涵体,不利于纯化.在22-25℃条件下诱导表达,虽然大肠杆菌生长较慢,但表达产物均为可溶性表达,且占菌体蛋白30％以上.利用GST亲和层析柱纯化,蛋白纯度大于90％.结论：成功构建了融合表达蛋白AnxB1-MLT的表达质粒,优化了诱导表达条件,获得了重组蛋白,为进一步通过动物模型研究其靶向抗肿瘤活性奠定了基础.
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