【摘 要】
：
采用PCR技术扩增出犬腺病毒(CAV)ORF1(p-Ⅷ)基因、犬细小病毒(CPV)VP2基因、鸡血红蛋白的珠蛋白基因(GLOBc)各保守基因片段；采用RT-PCR扩增出犬冠状病毒(CCV)纤突蛋白(S)基因、犬瘟热病毒(CDV)融合蛋白(F)基因、犬副流感病毒(CPIV)核衣壳结构蛋白(NP)基因、狂犬病病毒(RV)核蛋白(N)基因的各一段保守序列,克隆获取质粒.通过微量点样技术将这些质粒作为探针
【机 构】
：
山东澳兰生物工程研究院,山东,青岛,266101 山东省农业科学院,山东,济南,250100
【出 处】
：
中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会
论文部分内容阅读
采用PCR技术扩增出犬腺病毒(CAV)ORF1(p-Ⅷ)基因、犬细小病毒(CPV)VP2基因、鸡血红蛋白的珠蛋白基因(GLOBc)各保守基因片段；采用RT-PCR扩增出犬冠状病毒(CCV)纤突蛋白(S)基因、犬瘟热病毒(CDV)融合蛋白(F)基因、犬副流感病毒(CPIV)核衣壳结构蛋白(NP)基因、狂犬病病毒(RV)核蛋白(N)基因的各一段保守序列,克隆获取质粒.通过微量点样技术将这些质粒作为探针点。在硝酸纤维膜上,产生二维DNA探针阵列,制作成诊断基因芯片.对360份待检样品匀浆后提取核酸作为模板,扩增相应保守基因片断.通过生物素标记PCR(RT-PCR)技术,将所获得的扩增产物与诊断基因芯片进行特异性的逆向点。杂交,然后用扫描仪对芯片进行扫描分析、判断.结果表明,此方法比病毒分离、HI、PCR或RT-PCR方法灵敏度高、特异性强,平均检出率要高20％以上,并可同时对犬多种疫病进行快速诊断.
其他文献
通过考察中草药提取物对猪生殖和呼吸系统综合征病毒在传代细胞MARC-145细胞中增殖的影响,证明中草药提取物具有抑制病毒增殖作用.结果表明,中草药提取物能够显著抑制PRRSV体外增殖,时PRRSV的最小直接杀灭浓度为5％.
将PRRSV修饰的ORF5(MORF5)与ORF6基因分别克隆入笔者构建的改良型痘苗病毒安卡拉株(Modified vaccinia virus ankara,MVA)转移载体pLR-gpt的两个多克隆位点中,构建重组转移载体pLR-MORF5/ORF6.经脂质体介导,将构建好的重组转移载体转染感染亲本MVA 2h的BHK-21细胞单层,用药物选择性培养基(MXHAT)在24孔板上进行连续筛选纯化
蓝耳病的控制成为世界性难题,免疫预防成为人们关注的焦点.本文就中国猪场过去几年应用活疫苗情况,总结分析了Ingelvac(R)PRRS MLV对中国蓝耳病感染猪场的控制效果,为我国猪场使用活疫苗防控蓝耳病提供参考.湖北某猪场,2005年以来,每个月10窝猪整窝流产,母猪发病率达30％,通过免疫接种蓝耳病弱毒苗Ingelvac(R)PRRS MLV:首次普免后,间隔4周种猪再普免一次,3个月内,使得
本研究通过RT-PCR方法扩增获得了美洲型PRRSV N基因,分别构建了克隆载体pMD19-T-N和毕赤酵母表达载体pPIC9K-N,并进行了PCR和双酶切鉴定.PCR和双酶切鉴定结果均得到预期大小的片段,结果表明成功建立相应载体.将pPIC9K-N经Sac Ⅰ线性化后电转化毕赤酵母宿主菌GS115获得阳性重组菌,重组子经G-418筛选后表型鉴定为Mut+,且PCR鉴定为阳性.阳性重组子经甲醇诱导
将PRRSV长春分离株的GP5和M基因插入到鸡痘病毒转移载体pUTAL复合启动子下游,构建重组鸡痘病毒转移载体pUTAL-GP5-M.将该重组质枉与鸡痘病毒(FPV)282-E4株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),进行同源重组.通过3次BrdU加压筛选,经RT-PCR和间接免疫荧光方法鉴定重组病毒,表明目的基因在重组鸡痘病毒中得到表达.最终成功构建1株重组鸡痘病毒,并可正确表达PRRSV GP5和M
本文根据GenBank上登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒序列,设计一对引物用于扩增和截短表达M蛋白.经过PCR、酶切及测序鉴定,成功地构建了PRRSV M蛋白原核表达载体.重组菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析可检测到分子量大小约为27.3 ku的目的蛋白带,通过PRRSV猪阳性血清的Western-blotting检测,出现特异性的反应条带,结果表明表达的蛋白具有良好的特异性,这为该蛋白的应
根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因的核苷酸序列设计一对特异性引物,用PCR方法合成PRRSV S1 GP5蛋白非中和性表位缺失的tGP5基因,将基因定向连接在真核表达载体pcDNA3.1的HindⅢ和EcoR Ⅰ的多克隆位点之间,构建重组质粒pcDNA3.1-tGP5.转化DH5α感受态大肠杆菌,提取质粒.重组质粒经PCR、双酶切鉴定及DNA序列测定,成功构建
PRRSV是一个新出现的病原体,当前由于缺少有效的防治手段,对世界范围内养猪业造成重大经济损失.反向遗传技术作为现代病毒学上是最强大的基因工具,具备广泛的潜在用途,从基础的病毒生物学特性到功能基因组学以及新型疫苗研发探索等方面都发挥着愈发重要的作用.应用PRRSV感染性克隆,开发新型疫苗具有重大意义.为了开发低毒安全而又高效、遣传学稳定、具有较宽的交叉保护范围以及具有可与野毒相区分的遗传标记的新型
目的: 确定"猪高热综合征"的主要病原是否为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),为探寻高致病性病毒基因组结构和功能,高致病性蓝耳病发病机理.以及进一步研制针对后者的基因工程疫苗奠定基础.方法: 根据PRRSV基因组序列设计特异性引物,分五段扩增了高致病性PRRSV JX143株的全长cDNA,将各cDNA片段克隆到DBlueScript Ⅱ SK(+)载体中,进而利用重叠区中的单酶切位点将其连接
利用RT-PCR法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5和ORF6基因,分别构建pcDNA-ORF5、pcDNA-ORF5/6和pcDNA-ORF5-ORF6真核表达载体,磷酸钙共沉淀法瞬时转染293T细胞,48h后收集细胞,流式细胞仪检测,结果表明:PRRSV ORF5基因编码囊膜蛋白(E蛋白)能在在293T细胞表面表达,而由共表达M蛋白(ORF6基因编码的基质蛋白)介导的E蛋白的表达