目的:　　 口腔中的常见病、多发病如龋病、牙周病，是导致牙齿缺损、缺失的最主要原因，给人类的身心健康带来巨大的危害。龋病、牙周病的发生均与细菌感染有关，不论是致龋菌还是牙周致病菌，都必须先定植于牙齿或牙周组织表面，才能发挥其致病作用，所以，防止病原菌对组织的黏附、定植，是预防口腔感染性疾病的有效途径。　　 分泌型免疫球蛋白A（secretoryimmunoglobulinA，sIgA）主要存在于外分泌液中，对粘膜组织起免疫保护作用。口腔唾液中的sIgA可使病原微生物之间发生凝集现象，丧失活动能力，或者与病原微生物结合，阻断微生物表面的特异性结合点，从而干预微生物对口腔表面的附着，使之不再能附着到口腔表面，或至少使其附着量减少，所以说唾液中sIgA能阻止细菌在口腔组织的定植，是口腔抗感染的一道重要的天然免疫屏障。因此提高唾液中sIgA水平能减少细菌对口腔表面的附着，同时也可以对特异性抗原产生免疫作用，从而有效地预防口腔感染。　　 粘膜相关趋化因子CC家族的CCL25能定向引导记忆/效应T细胞和部分IgA抗体分泌细胞(IgA+ASC)的迁徙归巢，近年来的研究表明CCL25及其受体CCR9在人体小肠粘膜中表达最多，小肠中90％以上的T淋巴细胞都表达CCR9。除了诱导T淋巴细胞，B淋巴细胞的归巢也与CCL25/CCR9有关，在小鼠和人的小肠粘膜中IgA+ASCs上均有CCR9表达。　　 CCL25/CCR9在小肠中的表达和作用已得到肯定，但到目前为止，尚未发现唾液腺中有CCL25的表达。唾液腺是共同粘膜免疫系统的重要器官，唾液中的sIgA是由唾液腺中的浆细胞合成，所以本研究拟通过在唾液腺中转染含CCL25基因片段的质粒，介导更多的IgA+ASC归巢到唾液腺，从而提高唾液中sIgA水平，为预防口腔组织感染提供一种新的方法和依据。　　 方法:　　 1、从人小肠提取总RNA，设计引物，扩增CCL25基因片段并纯化回收;引入SacⅠ、HindⅢ两个酶切位点，与真核表达质粒pCMV-3Tag-9连接，酶切电泳验证CCL25连接正确;转化感受态E.coli.DH5α，小提后作酶切、PCR及DNA序列测定。　　 2、用Lipofectamine2000介导转染人胚肾293T细胞，实验分为空白组(B)、转染试剂对照组(M)、pCMV-3Tag-9/CCL25组(S)、pCMV-3Tag-9/GFP组(G)、pCMV-3Tag-9空载组(N)共5组。通过细胞培养、Real-timePCR和Westernblot检测转染效果。　　 3、Wistar大鼠颌下腺转染质粒，实验分5组:A组为空白对照组，B组为导管逆行灌注质粒pCMV-3Tag-9组，C组为腺体直接注射质粒pCMV-3Tag-9组，D组为导管逆行灌注质粒pCMV-3Tag-9/CCL25组，E组为腺体直接注射质粒pCMV-3Tag-9/CCL25组;分别在1天、2天、3天、1周、2周和1个月六个时间点收集唾液;3天时各组随机取1只大鼠的颌下腺。免疫组化和ELISA检测腺体转染结果及唾液中sIgA浓度。　　 结果:　　 1、重组质粒pCMV-3Tag-9/CCL25酶切后电泳显示在大约500bp和5000bp左右出现高亮度条带，与目的片断大小相符。经DNA测序所得序列结果与CCL25cDNA序列一致。　　 2、真核表达质粒pCMV-3Tag-9/CCL25转染293T细胞时，细胞状态良好，荧光强，24h、48h和72h转染细胞表达的GFP均超过70％，转染效率高。Real-timePCR各组基因的扩增曲线图形好，均呈“S”形，表明扩增正常。S组基因在24h和48h均明显地表现出比对照样品的基因表达水平高。Westernblot结果显示仅S组在20KD左右有明显条带(融合表达蛋白约为20KD)，且72H比48H的表达量明显高出很多。　　 3、免疫组化的结果可见D组整个腺体内均匀分布棕色颗粒，腺泡内阳性染色强。E组腺体内局部较密集的阳性染色。D组和E组唾液中sIgA水平明显高于其他组，有显著性差异(P＜0.01);D组sIgA水平随时间变化（1个月内）不断增加;E组sIgA水平随时间变化（1个月内）不断减少。　　 结论:　　 1、以携带趋化因子CCL25基因片段的质粒转染唾液腺，提高唾液中sIgA水平，避免某些病毒载体带来的安全隐患，为安全、有效地抵抗病原体感染、保护口腔组织健康提供了依据。　　 2、首次进行趋化因子CCL25基因片段转染唾液腺的研究，目前国内外未见相关报道。