目的：　　 本研究拟采用鱼藤酮诱导PC12细胞损伤建立帕金森病模型，探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的保护作用及其可能作用机制。　　 方法：　　 取对数生长期的大鼠嗜铬细胞瘤细胞株PC12细胞，设空白对照组，鱼藤酮50，100，250，500，1000nmol/L浓度组及EGCG1，5，10，50，100μmol／L浓度组，分别作用24h。根据MTT比色法筛选出鱼藤酮损伤模型的浓度及EGCG的给药浓度。　　 取对数生长期的PC12细胞，设空白对照组、鱼藤酮损伤组(250nmol/L)、EGCG(1，5，10μmol/L)预处理组。空白对照组不加药，损伤组只加鱼藤酮作用24h，预处理组先加入EGCG孵育30min后再加入鱼藤酮作用24h。然后进行各项指标的检测，包括：倒置显微镜下观察细胞形态的变化；MTT比色试验检测细胞存活率；Hoechst染色观察细胞核形态的改变及细胞凋亡比例；AnnexinV-FITC流式细胞仪检测细胞凋亡率；JC-1染色检测线粒体膜电位变化；荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)的变化。　　 结果：　　 1、鱼藤酮对PC12细胞的损伤作用　　 MTT法检测发现，不同浓度鱼藤酮(50，100，250，500，1000nmol/L)作用于PC12细胞24h后，细胞活力随浓度增加而逐渐下降，与正常对照组(100％)相比，差异均有统计学意义(P＜0.05)，细胞存活率分别为88.9％，80.6％，75.0％，45.4％和32.5％。其中，250nmol/L鱼藤酮处理24h后细胞活力为75±2.3％，较正常组明显降低（P＜0.01），将此浓度和作用时间作为下一步实验的干预点。　　 2、EGCG对鱼藤酮诱导的PC12细胞存活率的影响　　 MTT检测发现，不同浓度EGCG(1，5，10，50，100μmol/L)单独作用PC12细胞24h后，与正常对照组相比，1，5，10μmol/LEGCG处理组细胞活力无明显变化（P＞0.05）。而50，100μmol/LEGCG处理组细胞活力下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。故选取EGCG1，5，10μmol/L作为下一步实验的药物浓度。鱼藤酮250nmol/L组细胞存活率为(77.0±1.3)％，较正常组(100.0±2.9)显著下降(P＜0.01)；与鱼藤酮组比较，EGCG1，5，10μmol/L预处理组细胞存活率显著增加（P＜0.05），分别为(79.8±2.3)％，(82.4±2.2)％和(88.3±2，0)％。　　 3、EGCG对鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤的形态学影响　　 倒置显微镜下，正常对照组细胞贴壁良好，形态规则，表现为梭形，胞体和轴突完整。鱼藤酮组细胞胞体肿胀，形态不规则，出现球形或椭圆形细胞，其数量随鱼藤酮浓度的增加而增多。与鱼藤酮组相比，EGCG预处理组细胞肿胀好转，球形和椭圆形细胞明显减少。　　 4、EGCG对鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡的影响　　 Hochest33258染色发现，正常组细胞核呈蓝色，边缘光滑，均匀淡染，鱼藤酮处理组部分细胞核固缩，呈致密浓染，显示较强荧光，甚至可见胞核裂解，而EGCG预处理组胞核形态改善，荧光强度减弱；与正常组比较，鱼藤酮组细胞凋亡率增加8.2倍；与鱼藤酮组比较，EGCG预处理组细胞凋亡率分别下降了46％，25％和63％，差异具有统计学意义(P＜0.05）。流式细胞仪检测鱼藤酮组凋亡率为33.8％，EGCG1，5，10μmol/L预处理组的凋亡率下降至30.6％，14％和15.7％。5、EGCG对鱼藤酮诱导的PC12细胞线粒体膜电位的影响　　 JC-1染色检测发现，EGCG1，5，10μmol/L预处理组表明线粒体膜电位的红／绿荧光强度比值为0.87±0.16，1.24±0.08和1.26±0.16，明显高于鱼藤酮组(0.25±0.05)，差异具有统计学意义（P＜0.05），提示鱼藤酮可导致PC12细胞的线粒体膜电位下降，而EGCG能够抑制鱼藤酮诱导的线粒体膜电位下降。6、EGCG对鱼藤酮诱导的PC12细胞内ROS水平的影响　　 荧光探针DCFH-DA检测显示鱼藤酮组绿色荧光强，细胞内ROS水平为(341.6±21.5)％，较正常对照组(100.0±23.1)％明显增高（P＜0.01），而EGCG预处理组ROS水平较鱼藤酮组荧光减弱，细胞内ROS水平降低，分别为(220.7±20.9)％，(199.9±13.7)％，(149.9±13.5)％(P＜0.05)。表明EGCG能一定程度上抑制鱼藤酮诱导的细胞内ROS水平的增高。　　 结论：　　 1、鱼藤酮对PC12细胞具有损伤作用；　　 2、EGCG能减轻鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤；　　 3、EGCG对鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用可能与其抗凋亡、稳定线粒体膜电位、清除氧自由基有关。