龙血竭是百合科龙血树属植物剑叶龙血树Dracaena cochinchinensis(Lour.)S.C.Chen提取的树脂[1]。具有活血化瘀、消炎止痛、止血生肌等功效,主要应用于外伤出血、跌打损伤、溃疡不敛等症,在临床上有广泛的应用。由于龙血竭水溶性低,口服后在体内不易分散溶出,从而使临床使用范围受到了限制,因此将其制成包合物,提高其溶解度,从而提高生物利用度,并节约了药物资源。环糊精能将水不溶性分子包入其疏水空腔形成水溶性包合物,增加了药物的溶解性,提高其生物利用度。包合物形成后,应采用适当的方法,对包合物的质量进行系统的评价,以检验包合工艺的合理性。包合率是评价包合物质量的重要指标,所以应建立完整的包合率测定方法,才能对包合物进行有效评价。但是通过直接测定包合物中药物含量来确定包合率,会受到未被包合、吸附在包合物表面游离药物的干扰,且尚未见有关龙血竭包合物包合率检测方法的报道,因此本课题首次筛选分离包合物与游离药物的溶剂系统,建立龙血竭包合物包合率的检测方法。并首次通过各项定性及定量指标,对龙血竭包合物质量进行系统评价的研究。在此基础上,由于目前对提高包合率的研究多考虑包合物制备工艺的筛选,对添加亲水性聚合物来提高中药包合物包合率的方法研究尚浅,因此,本课题首次尝试在龙血竭包合物中添加亲水性聚合物,提高其包合率,进而优化其处方工艺。目的 建立龙血竭包合物包合率的检测方法;以包合率和包合物收率的综合评分为指标,采用正交试验设计法,对包合物制备工艺进行优化;并以物相鉴定、溶解性、包合常数等为关键质量指标,对优化后的包合物进行系统的质量评价;最后,通过加入亲水性聚合物,对包合物处方工艺进行优化,探索产品二次开发的可行性与策略。方法与结果 1.龙血竭包合物包合率的检测方法通过建立HPLC测定龙血素A含量的方法,进而对洗脱提取溶剂系统进行筛选,考察了溶剂极性、用量及提取方法对包合率测定的影响,进而建立龙血竭包合物包合率的测定方法。研究结果得出,HPLC测定龙血素A含量的色谱条件为C18色谱柱,流速为1.0 m L·min-1,柱温为30℃,流动相为1%冰醋酸-乙腈(63:37),进样量为10μL。确定了最佳洗脱方法,即采用乙酸乙酯溶液洗脱5次,每次20 m L;最佳提取方法,即采用25 m L甲醇溶液超声提取30 min,从而验证了包合率检测方法的可靠性。2.包合物制备工艺的筛选通过包合反应的单因素考察,确定影响因素的水平范围;并对制备工艺的影响因素进行正交试验,选取β-环糊精与龙血竭的投料比、包合时间、包合温度为考察因素,以包合率及包合物收率的综合评分为指标,筛选出最佳制备工艺。由正交试验可知,影响龙血竭包合物的主要因素为投料比,且有显著性差异。从而得出包合反应的最佳工艺条件为:投料比为4:1,包合时间为2 h,包合温度60℃。3.包合物的物相鉴定采用扫描电镜法、红外光谱法、X-射线衍射法、紫外分光光度法,通过龙血竭、β-环糊精、包合物及其相应配比的物理混合物的多种性质比较,综合证明了龙血竭与β-环糊精形成了稳定的包合物;并验证了包合过程是物理作用及包合物洗脱工艺的可靠性。4.包合物溶解性、溶出速率及包合常数的测定通过龙血竭包合前后溶解性和溶出速率的对比试验,结果表明,包合物溶解度明显高于龙血竭,且包合物的溶出速率及累计溶出度相对于龙血竭有明显提高。采用相溶解度法,作龙血素A的摩尔浓度随β-环糊精的摩尔浓度变化曲线,进而确定包合比为1:1,并计算得包合物的平衡常数K为506 L·mol-1。5.包合物处方工艺优化的研究考察羧甲基纤维素钠(Carboxymethylcellulose sodium,CMC-Na)及聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpyrrolidone,PVP)对包合作用的影响。结果表明,包合率随着CMC-Na百分含量的增加而减小,说明CMC-Na不利于包合物的形成;而包合率随着PVP的百分含量的增加而增加,包合率可提高到90%以上,表明PVP有利于包合物的形成。在此基础上,扫描电镜法与X-射线衍射法可以鉴别其已形成了稳定的包合物。结论 本课题建立龙血竭包合物包合率的检测方法;采用正交试验法筛选出包合物的最佳制备工艺;通过包合率、物相鉴定、包合物溶解性、溶出速率及包合平衡常数对包合物进行质量评价,进而可以表明龙血竭制成包合物后,其在水中的溶解性有显著的提高,从而有效的验证了包合工艺的合理性;通过包合处方工艺的优化研究,证明了PVP具有提高包合率的作用,为龙血竭包合物工艺的进一步优化奠定了基础。