妊娠期DEHP暴露对小鼠胎盘生长与发育的影响

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目的:邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(Di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP)作为一种增塑剂被广泛使用且存在于环境中,由于DEHP与塑料制品之间不能共价结合,且随着产品的反复使用、加热及清洗,其可通过呼吸道、消化道及皮肤等途径进入机体,对动物和人类生殖系统造成危害。已有研究显示,妊娠期DEHP暴露,可导致子宫内膜接受性明显下降、妊娠率降低、流产率升高以及胎儿体重减轻等现象。然而,这些是否与妊娠期间DEHP暴露导致胎盘的生长发育障碍密切相关呢?至目前为止,还未见相关的研究。本项目拟通过强制性灌胃方法,在体观察围植入期DEHP暴露对妊娠小鼠胎盘生长和发育的影响。方法:从妊娠第1天起,通过体外强制性灌胃方法给予不同剂量的DEHP(125、250、500 mg/kg/day),于妊娠第9天(GD9)和13天(GD13)取子宫、胚胎及胎盘标本。通过HE染色观察DEHP暴露对胎盘组织结构的影响;通过免疫组织化学方法观察DEHP暴露对胎盘增殖和迷路层血管发育的影响;通过实时定量PCR分析DEHP暴露对胎盘标志性基因表达水平的影响;Western blot方法分析DEHP暴露对胎盘凋亡及相关的信号通路的影响。结果:(1)在GD9,与对照组相比,不同剂量DEHP处理对胚胎的重量以及胚胎与体重的比值,均无明显影响(P>0.05)。然而,在GD13,随着DEHP浓度的增加,胚胎加胎盘的重量以及其与体重的比值均显著性降低(P<0.05或0.01);胎盘的重量及其与体重的比值均低于对照组(P<0.01)。(2)在GD9,DEHP的暴露明显抑制了外胎盘锥的生长和发育。在GD13,与对照组相比,DEHP的暴露明显降低胎盘总面积及海绵层细胞的面积(P<0.05或0.01)。(3)在GD9、GD13,与对照组相比,DEHP暴露均明显抑制胎盘中Ascl2、Esx1 mRNA的表达水平(P<0.05或0.01)。在GD9,DEHP处理组Fosl1 mRNA的表达水平与对照组之间无显著性差异(P>0.05)。然而,在GD13,与对照组相比,dehp暴露均明显抑制胎盘中fosl1mrna的表达水平(p<0.01),增加eomes、hand1mrna的表达水平(p<0.05或0.01)。(4)在gd13,与对照组相比,dehp暴露可明显抑制小鼠胎盘迷路层血管的形成。(5)免疫组织化学结果显示,在gd9、gd13,与对照组相比,外胎盘锥、胎盘迷路层及海绵层的ki67阳性细胞均明显下降(p<0.05或0.01)。(6)在gd13,与对照组相比,dehp处理组胎盘bax、caspase-3和caspase-8mrna表达水平均显著性升高,bcl-2mrna表达水平显著降低(p<0.05或0.01)。然而,在gd9,dehp处理组与对照组之间没有显著性的差异(p>0.05)。免疫印迹结果显示,在gd9、gd13,与对照组相比,dehp处理组caspase-3和caspase-8均被激活。在gd13,dehp处理组bax蛋白表达水平明显升高,而bcl-2蛋白水平明显下降(p<0.01)。(7)westernblot检测显示,在gd9,与对照组相比,250mg/kg/day和500mg/kg/day的dehp处理明显增加erk1/2磷酸化水平(p<0.01)。在gd13,erk1/2磷酸化水平随着dehp浓度的增加而显著性增加(p<0.05或0.01)。结论:(1)妊娠期间dehp暴露可显著性抑制小鼠外胎盘锥和胎盘的生长与发育。(2)妊娠期间dehp暴露可破坏小鼠胎盘迷路层血管的形成。(3)妊娠期间dehp暴露可明显抑制小鼠外胎盘锥和胎盘的增殖。(4)dehp可通过激活mapk信号通路以及凋亡相关其因caspase-3、-8、bax上调和bcl-2下调促进胎盘的凋亡。
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