论文部分内容阅读
背景载脂蛋白M(apoM)是一种新近发现的载脂蛋白,蛋白结构属于脂质转运蛋白超家族成员,主要存在于高密度脂蛋白(HDL)中,少量存在于富含甘油三酯的脂蛋白(triglyceride-rich lipoprotein,TGRLP)和低密度脂蛋白(LDL)中。现有的动物实验发现apoM的缺失会导致血浆preβ-HDL的消失和异常大的HDL颗粒的出现。在LDL受体缺陷小鼠,腺病毒致肝脏apoM的过度表达可使动脉粥样硬化病变明显减少。提示apoM可调节HDL代谢,并具有抗动脉粥样硬化的作用。时至今日,虽然apoM的cDNA在1999年被克隆和测序,但是apoM的生理功能及其与动脉粥样硬化疾病的关系依然不甚明了。现已证明糖代谢的紊乱可以促进动脉粥样硬化的发生发展,糖尿病已视为冠心病的等危症。罗格列酮(RSG)是目前临床上常用的治疗糖尿病的有效药物,它是否能影响apoM的作用知之甚少。目的研究糖尿病大鼠血清apoM水平和肝肾脂肪组织apoM mRNA表达的变化以及RSG的影响,探讨apoM作用和调控的可能机制。方法采用40只雄性SD大鼠进行动物实验,建立对照组、高脂组、糖尿病组和糖尿病RSG干预组4组动物模型。实验模型建立前采血检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)。糖尿病大鼠模型的建立参照周氏等方法,给予高脂高糖饲料喂养、腹腔注射链脲佐菌素。应用RSG对糖尿病大鼠干预治疗8周。全部动物实验于第15周结束时集中处死动物,搜集血标本和肝、肾、脂肪组织标本。检测各组大鼠的血FBG、FINS、TG、TC浓度和各组大鼠肾脏病理改变。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组的大鼠的血apoM水平;并与血FBG、FINS、TG、TC水平进行相关分析。逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)测定各组大鼠肝肾脂肪组织apoM mRNA的表达。结果1.与对照组和高脂组大鼠比较,糖尿病大鼠血清apoM水平明显降低,差异均有统计学意义(P均＜0.05),糖尿病大鼠血清apoM水平较对照组的下降65.4%;而与糖尿病组比较,RSG干预组大鼠的血清apoM水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05)。2.各组大鼠的肝、肾、脂肪组织均有ApoM mRNA的表达,其中肝组织apoM mRNA的表达最高,肾组织次之,而脂肪组织的表达最低(P均＜0.05)。与对照组相比,高脂组、糖尿病组的大鼠肝、肾、脂肪组织apoM mRNA的表达明显减少(P均＜0.05),与对照组比较,糖尿病大鼠肝脏apoM mRNA表达下降41.4%,肾脏apoM mRNA表达下降22.9%。而与糖尿病组比较,RSG干预组大鼠肝、肾、脂肪组织apoM mRNA的表达量均有明显增加(P均＜0.05)。3.大鼠血清apoM水平,与血清TG(r=-0.466,P=0.011),TC(r=-0.568,P=0.001),FBG(r=-0.371,P=0.000),INS(r=-0.768,P=0.048)水平,均呈显著负相关。结论糖尿病大鼠血清apoM水平和肝、肾、脂肪组织apoM mRNA的表达均下降;罗格列酮上调糖尿病大鼠的血清apoM浓度和肝、肾、脂肪组织中的apoM mRNA的表达;apoM水平与TG、TC、FBG和FINS呈显著负相关;提示apoM参与血糖和血脂的代谢并受罗格列酮的影响。背景载脂蛋白M(apoM)被认为是在高密度脂蛋白(HDL)代谢及抗动脉粥样硬化中发挥重要作用的载脂蛋白。过氧化物酶增殖体激活型受体(PPAR)属于核激素受体超家族的新成员。PPAR与其配体结合可发挥生物学作用,在脂肪细胞代谢和动脉粥样硬化形成和发展中起重要作用。胰岛素增敏剂RSG是PPARγ的人工配体,通过活化PPARγ而起作用。本实验的前期研究发现糖尿病大鼠血清apoM水平与组织apoM mRNA的表达下降,罗格列酮可上调糖尿病大鼠的血浆apoM浓度和组织apoM mRNA的表达,但是apoM的作用机制究竟与PPARγ是否有关,糖尿病大鼠PPAR的表达有何改变,PPARγ配体对两者表达的影响如何,目前罕见文献报道。目的研究糖尿病大鼠PPARα、PPARγ表达的变化,以及大鼠PPARα、PPARγ表达与apoM表达的相关性,并探讨PPARγ配体对表达的影响。方法采用40只雄性SD大鼠进行动物实验,建立对照组、高脂组、糖尿病组和糖尿病RSG干预组共4组动物模型(见第一章)。全部动物实验于第15周结束时集中处死动物,搜集血标本和肝肾脂肪组织标本。逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)测定各组的大鼠肝、肾、脂肪组织apoM mRNA的表达;逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测大鼠肝、肾、脂肪组织PPARαmRNA和PPARγmRNA的表达。分析大鼠肝、肾、脂肪组织apoM mRNA与PPARαmRNA和PPARγmRNA表达的相关性。结果1.PPARαmRNA在大鼠的肝脏表达最高,其次在肾脏,脂肪组织的表达最低。与对照组和高脂组大鼠比较,糖尿病大鼠PPARαmRNA在肝脏组织的表达明显减低(P均＜0.05);而与糖尿病组比较,RSG干预组大鼠PPARαmRNA的表达明显升高(P＜0.05)。2.PPARγmRNA在大鼠脂肪组织高表达,明显高于肝脏和肾脏组织(P均＜0.05)。与对照组和高脂组比较,糖尿病大鼠PPARγmRNA在肝脏和脂肪组织中的表达明显升高(P均＜0.05);而与糖尿病组比较,RSG干预组大鼠PPARγmRNA的表达明显降低(P＜0.05)。与对照组和高脂组比较,糖尿病大鼠PPARγmRNA在肾脏组织的表达明显减低(P均＜0.05);而与糖尿病组比较,RSG干预组大鼠PPARγmRNA的表达明显升高(P＜0.05)。3.大鼠肝、肾、脂肪组织apoM mRNA与PPARαmRNA的表达均无相关性,而与PPARγmRNA的表达均有显著相关。在大鼠肝脏和脂肪组织中,apoM mRNA与PPARγmRNA的表达呈显著负相关(P均＜0.01);而在肾脏组织中apoM mRNA与PPARγmRNA的表达呈显著正相关(P＜0.01)。结论PPARαmRNA在大鼠的肝脏表达最高,PPARγmRNA在大鼠脂肪组织呈现高表达;PPARγ激动剂可影响糖尿病大鼠PPARαmRNA和PPARγmRNA的表达;大鼠肝、肾、脂肪组织apoM mRNA与PPARγmRNA的表达呈显著相关;提示apoM可能通过PPARγ的调控而起作用。第三章载脂蛋白M与冠状动脉粥样硬化性病变的研究背景血脂异常不仅与动脉粥样硬化的发生发展有着密切的关系,而且对冠心病的急性事件(冠脉猝死、急性心肌梗死和不稳定型心绞痛)的发生起重要作用。载脂蛋白作为脂蛋白的主要组成部分参与了血脂的代谢和调节,载脂蛋白异常和冠心病的发生发展密切相关。已证实HDL-C低水平、LDL-C和TG高水平可以增加患心血管疾病的风险,HDL被广泛认为具有心脏保护和抗动脉粥样硬化的作用。载脂蛋白M(apoM)对HDL的代谢起重要作用,具有抗动脉粥样硬化的作用。然而,apoM的生理功能及与心血管疾病的关系仍未明了,关于apoM与不同冠状动脉粥样硬化病变程度的研究目前尚未见报道。目的研究apoM与冠状动脉粥样硬化病变的关系,进一步揭示apoM的生物学功能及apoM在人血清中含量的临床意义。方法采用经典的冠状动脉造影术检查,选择73例冠心病患者(冠心病组)及47例冠状动脉造影正常者(对照组)作为研究对象。根据冠心驳牟煌俅怖嘈徒谛牟』颊叻治毙怨诼鲎酆险?ACS)组和稳定型心绞痛(SA)组,并根据冠状动脉病变数量、Gensini冠状动脉粥样硬化的狭窄程度评分和ACC/AHA制定的冠状动脉A、B、C型病变分型评估冠状动脉粥样硬化病变的程度。应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测研究对象血清中apoM和瘦素的水平,分析不同临床类型冠心病和不同程度冠状动脉粥样硬化病变的apoM的变化及规律,并分析apoM与瘦素、HDL-C、apoAI、LDL-C、LP(a)、FFA、apoB等因素的相关性。结果1.与对照组相比,冠心病组血清apoM的水平明显降低,瘦素水平明显升高,差异有统计学意义(P均＜0.05)。2.急性冠脉综合征组的血清apoM水平明显低于稳定型心绞痛组和对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。3.冠心病患者血清apoM的水平与冠脉病变数量、冠脉狭窄程度和冠脉病变分型均有关。多支病变组血清apoM水平明显明显低于单支病变和双支病变组(P均＜0.05),中度狭窄组血清apoM水平明显低于轻度狭窄组(P＜0.05),重度狭窄组血清apoM水平分别低于轻度和中度狭窄组(P均＜0.05),C型病变组血清apoM水平分别低于A型和B型病变组(P均＜0.05)。4.血清apoM的水平与冠脉病变数量、病变分型、Gensini积分呈负相关(P均＜0.05),与瘦素、HDL-C、HDL-C/TC呈正相关,与LDL-C、FFA呈负相关(P均＜0.05)。多元逐步回归显示血清apoM的水平与瘦素的关系最密切。结论冠状动脉粥样硬化心脏病患者血清apoM水平明显降低,冠状动脉粥样硬化病变的程度越重,apoM水平越低;apoM的水平与Leptin、HDL-C、HDL-C/TC呈正相关,与LDL-C、FFA呈负相关;提示人血清apoM水平与脂质代谢和冠状动脉粥样硬化的程度有关。