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目的:本课题利用RT-PCR、免疫组化方法及MSP法，测定PTEN在食管癌组织、食管癌癌旁组织及正常食管组织中的表达差异，检测CHFR在食管癌组织、食管癌癌旁组织及正常食管组织中的甲基化状况及表达差异，深入探索PTEN和CHFR在食管癌发生发展中的作用。通过观察PTEN和CHFR在食管癌组织、食管癌旁组织及食管正常粘膜组织中的表达差异，了解PTEN和CHFR在食管癌发生及发展中的作用，为临床利用基因工程治疗食管癌提供新的思路。 方法:采集邢台市人民医院2013年-2014年食管鳞癌各期患者外科59例手术标本，按不同组织分化程度分级。①以逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-PCR， RT-PCR)对PTEN mRNA进行扩增，琼脂糖凝胶电泳后在紫外灯下观察结果并拍照并分析RT-PCR条带图像，算出积分光密度和目的核酸片段的表达变化。②对组织切片以SABC(StreptAvidin-Biotin Complex)法进行免疫组化染色，对阳性细胞所的占百分比及染色强度记录并打分，两者乘积的结果为最后的得分，以便确定其阳性水平。③利用甲基化特异性聚合酶链式反应(Methylation-Specific PolymeraseChain Reaction，MSP)检测CHFR在食管癌演进不同状态下的甲基化。以上实验数据用SPSS软件包进行统计学分析，RT-PCR检测的计量资料用（x±s）表示，定量资料用单因素方差分析检验;PTEN表达观测采用X2检验，MSP结果做Fisher精确检验。检验水准P＜0.05为差异显著，P≥0.05为差异不显著。 结果: 1.RT-PCR结果显示，PTENmRNA在食管鳞癌患者的远癌食管粘膜、癌旁组织和癌组织的相对表达量及各级鳞癌组织有显著差异(P＜0.05)。 2.免疫组化结果显示，59例标本中的正常食管鳞状上皮组织，有57例阳/弱阳性表达(96.61％)，PTEN蛋白表达均衡，弥散于胞浆;癌组织中有39例阳/弱阳性(49.15％)，显著低于其正常食管的粘膜上皮组织(P＜0.05)。癌旁组织中有42例阳/弱阳性(71.19％)表达，X2检验显示差异有统计学意义（P＜0.05）。其中T1期EC有10例阳性，5例阴性，T2期EC有14例阳性，7例阴性，T3期EC有5例阳性，18例阴性，T1-3期EC失表达率有逐渐增加趋势，差异有统计学意义(P＜0.05）。实验结果提示随着食管的鳞状上皮粘膜分化程度与PTEN蛋白表达率的一致性。 3.MSP检测结果显示:59例标本中，CHFR基因在食管癌组织中28例发生甲基化;癌旁组织有1例甲基化;远癌食管粘膜未见甲基化。以Fisher精确检验，三者相比有统计学差异(P＜0.05);28例CHFR甲基化标本中，T1期EC有7例阳性，8例阴性，T2期EC有9例阳性，12例阴性，T3期EC有12例阳性，11例阴性，T1-3期肿瘤细胞的甲基化无明显统计学差异(P＞0.05）。 结论: 1.PTEN蛋白在EC、癌旁组织及远癌食管粘膜中定位于胞核及胞浆; 2.随着食管鳞状上皮的粘膜从正常转化到癌变，抑癌基因PTEN蛋白失表达率呈逐步增加，但其在胞核内的表达却有上升趋势。 3.CHFR基因在食管癌组织中发生高甲基化。 4.PTEN的缺失表达是EC发生和发展的过程中的比较重要的事件。PTEN蛋白的检测有助于EC的病理的诊断，以及预后的判断;而食管癌的CHFR的甲基化是其特征性表现，但由于各期未能见到明显甲基化差异，不建议将CHFR甲基化用于食管癌早期的检测，比较适合的应用是其诊断检测。