基于碳点的荧光免疫分析法的草甘膦检测研究

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草甘膦,化学名为N-膦羟甲基甘氨酸,是一种有机磷除草剂,其在农产品中的残留对人类食物安全构成威胁,进入环境中对生态产生有害影响,对其进行监控检测具有重要意义。由于草甘膦农药分子结构简单,没有明显的光电检测信号,无法采用一种简单,快捷的方法对其进行检测。本文制备基于新型纳米材料碳点的免疫荧光探针,对草甘膦进行标记成像以及定量检测。主要工作如下:  将草甘膦与BSA偶联,合成出了草甘膦人工抗原。将人工抗原与弗氏佐剂等体积混合的乳液通过背部皮下注射的方法注入到新西兰大白兔体内进行免疫得到GLY抗体。该GLY的抗体双向扩散效价在1∶32以上,浓度为12.7mg/mL。通过高温水热法合成得到了荧光性能较好的碳点,其粒径为5~8 nm,激发波长/发射波长为344 nm/444 nm,荧光量子产率为57.19%。以EDC/NHS为偶联剂,将合成的GLY抗体和碳点偶联得到荧光探针lgG-CDs,采用荧光光谱分析,红外光谱分析,紫外光谱分析,马尔文粒度分析方法对其进行表征。将此荧光探针应用于白菜幼苗中的草甘膦残留成像研究,激光共聚焦实验证明,该探针能很好地识别白菜幼苗中的草甘膦农药残留。  合成抗原磁珠,通过其消除过量游离荧光探针对GLY定量检测的影响,构建新型荧光免疫分析体系定量测定GLY。发生免疫反应的荧光探针lgG-CDs的荧光强度与草甘膦的浓度的对数之间存在线性关系,线性方程为F=2099+1022lgCGLY(CGLY单位:μg/mL),线性范围为0.01~80μg/mL,检出限为8 ng/mL。该方法可用于珠江水、茶叶、土壤实际样品中草甘膦农药的检测,回收率在87.4%~103.7%。  本文的创新点是设计并制备了荧光探针lgG-CDs,建立了一种原位可视化荧光检测草甘膦及其分布的方法;构建了抗原磁珠,通过磁性分离消除过量荧光探针对测定的干扰,建立了高灵敏度,高选择性的新型荧光免疫分析体系,能够快速定量分析草甘膦农药残留。
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