六省区羊布病流行病学调查及S2疫苗免疫机制的初步分析

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布鲁氏菌病(简称布病)属于人畜共患性传染病,不仅给畜牧业造成重大的经济损失,还严重危害公共卫生安全。近年来,布病在全球呈多发态势并有逐步扩大的趋势。安全高效的布病疫苗依然处于研发阶段,虽然布病弱毒疫苗在布病防控过程中发挥着关键作用,但是弱毒疫苗的接种导致布病血清学检测方法受到干扰,阻碍了发病动物和隐性感染动物的检疫淘汰过程,并且布病弱毒疫苗在免疫动物时免疫效果与接种途径和接种剂量息息相关,布病弱毒疫苗免疫机体后在产生保护性抗体的机制尚不完全清楚。为了解我国绵羊和山羊布病的流行现状和布病疫苗的免疫接种情况。本研究对2017-2019年我国部分省(区)的绵羊和山羊布病展开血清学调查,建立了一种高效准确的布病血清学筛查方案。实验结果表明,结合羊群疫苗免疫程序并排除自然感染后康复羊只,三种血清学方法的联合检测能够有效的检出布病血清抗体阳性羊只。调查结果表明,来自6省(区)的2183份羊血清(RBPT)试验总阳性率为35%,(i-ELISA)试验总阳性率为21%,(RBPT)和(i-ELISA)试验均呈阳性的羊只血清(c-ELISA)试验阳性率为79%。北方四省(区)2008份羊血清布病抗体总阳性率为13.45%,南方两省(区)175份羊血清布病抗体总阳性率为2.86%。其中规模化养殖场的975份羊血清布病抗体总阳性率为8.62%,养殖专业合作社的521份羊血清布病总阳性率为15.43%,来自牧民或农户的687份羊血清布病抗体总阳性率为16.30%。猪种布鲁氏菌S2株疫苗是我国目前主要的羊用布病弱毒疫苗,为了更好的了解S2株疫苗免疫羊只后短期内机体各方面的动态变化过程,从而更好地了解和掌握布病弱毒疫苗的免疫保护机制。实验组和对照组羊只在免疫前后进行体温监测、组织载菌量测定、血清虎红平板凝集试验(RBPT)、血清布病抗体竞争酶联免疫吸附试验(c-ELISA)、细胞因子IL-6,IL-12 p70,IFN-γ间接酶联免疫吸附试验(i-ELISA)和淋巴组织石蜡切片及HE染色等对猪种布鲁氏菌S2株疫苗免疫羊只后机体各方面的变化情况进行统计分析。结果表明,疫苗免疫9天内羊只整体体温波动较大呈上升趋势,10-30天体温波动较小处于平稳状态。血清(RBPT)试验结果表明,布病血清抗体在羊只体内呈现先上升到一定水平后维持一段时间继而逐渐下降的一个过程。免疫后7天和14天,仅在部分羊只颌下淋巴结组织分离到布鲁氏菌,而其他时间点的羊只采样组织内均未分离得到布鲁氏菌。可能是因为随着免疫后时间的增加宿主组织中的活菌被机体的免疫系统清除,无法分离到活菌。免疫后0-30天羊只体内与布鲁氏菌侵染相关的IL-6的表达量持续增加,免疫后30-90天,羊只体内的IL-6表达量逐渐减少。IL-12 p70和IFN-γ的表达量在免疫后30-90天内逐渐增多,而在免疫后0-30天,这两种细胞因子的表达量变化波动不大。对组织切片进行观察,对照组羊只淋巴组织未见明显淋巴小结结构,未见明显髓质,整体淋巴细胞数量正常。实验组羊只可见明显的淋巴小结结构和明显淋巴小结生发中心。当机体受到抗原刺激时,淋巴小结生发中心迅速增大,淋巴细胞及淋巴小结数量随着免疫时间的变化而变化。
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