【摘 要】
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目的以脂多糖（LPS）及三磷酸腺苷（ATP）刺激原代脑微血管内皮细胞（Brain microvascular endothelial cells,BMECs）,探讨NLRP3炎症小体相关炎症因子IL-1β和IL-18在原代BMECs中的激活及作用,进一步探讨其与脑小血管病（CSVD）的相关性,为基于免疫炎症寻找新型CSVD的诊疗标记物,从而开发新型治疗CSVD的药物,提供实验依据和理论基础。方法获
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目的以脂多糖（LPS）及三磷酸腺苷（ATP）刺激原代脑微血管内皮细胞（Brain microvascular endothelial cells,BMECs）,探讨NLRP3炎症小体相关炎症因子IL-1β和IL-18在原代BMECs中的激活及作用,进一步探讨其与脑小血管病（CSVD）的相关性,为基于免疫炎症寻找新型CSVD的诊疗标记物,从而开发新型治疗CSVD的药物,提供实验依据和理论基础。方法获取较高纯度的原代BMECs,细胞形态学观察原代BMECs的生长情况;细胞免疫荧光染色检测原代BMECs标志物VIII因子相关抗原（vWF）及神经胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的表达情况。实验分正常对照组、LPS刺激组、LPS和ATP共同刺激组;ELISA检测各实验组BMECs的NLRP3炎症小体相关炎症因子IL-1β和IL-18的表达情况;MTT法检测各实验组BMECs存活率。结果（1）细胞形态学观察脑微血管段在分离培养48h后,呈典型的“串珠状”或“分枝状”;培养第4d时脑微血管段周围爬出内皮细胞,呈典型的“短梭形”;培养第8d时细胞汇合度达80%以上,表现典型“铺路石”或“漩涡状”;细胞免疫荧光染色法结果显示v WF表达阳性,GFAP表达阴性,BMECs纯度（v WF的阳性细胞表达率）达95%以上;（2）ELISA结果显示,与正常对照组相比较,LPS单独刺激组BMECs的IL-1β和IL-18表达无显著影响（P>0.05）;而LPS和ATP共同刺激组BMECs的IL-1β和IL-18表达明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）;（3）MTT结果显示,与正常对照组相比较,LPS单独刺激组BMECs存活率降低,但差异无统计学意义（P>0.05）;而LPS和ATP共同刺激组BMECs存活率明显降低,几乎无存活的细胞,差异有统计学意义（P<0.05）。结论（1）LPS和ATP两种促炎剂可以刺激原代BMECs中NLRP3炎症小体相关炎症因子IL-1β和IL-18的产生明显增加;（2）LPS和ATP两种促炎剂可以明显降低原代BMECs的存活率;（3）NLRP3炎症小体相关炎症因子IL-1β和IL-18可能与CSVD的发病机制有关。
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