在激素基因免疫实践中发现,将抑制素基因疫苗免疫大动物,有近一半的个体对抑制素体液免疫没有产生应答反应,具体原因尚不明晰。本研究利用减毒沙门氏菌为载体的抑制素基因疫苗免疫西门塔尔牛,旨在探讨抑制素基因疫苗的促繁殖效果,并筛选与体液免疫反应有关的差异基因,为进一步完善抑制素基因免疫技术,提高抑制素基因免疫效果,促进其在动物繁殖领域的推广与应用,以及为探讨基因免疫应答分子机制奠定基础。主要研究内容与结果如下:1.抑制素基因免疫对西门塔尔牛卵泡发育及受胎的影响选择41头西门塔尔牛分为两组:对照组(n=11)注射10 ml PBS/头,免疫组(n=30)每头注射10~9CFU/ml的抑制素重组菌C501(pVAX-asd-IS)10 ml。以初次免疫为第0天,14天后加强免疫,第28天对未发情牛用Ovysnch程序进行同期发情-定时人工授精处理,第29天进行B超检测,连续查6天,每天查一次,记录卵泡发育和排卵情况。结果显示,肌肉免疫抑制素重组菌C501后4周的抗体阳性率和抗体滴度均显著高于2周;免疫组大卵泡的数目(2.46±0.22 vs 1.50±0.29,P<0.05)与直径均高于对照组(13.11±0.47 vs 11.92±0.86));免疫组自然发情牛的排卵率(92.9%vs 75%)与受胎率(85.71%vs 75%)均高于对照组自然发情牛。2.抑制素基因疫苗在西门塔尔牛上的生物安全性评价观察免疫后牛只精神及采食情况,并于免疫后0、1、3、5、7、11、15、17、21、35天采集粪便、水和土壤样本,用PCR方法检测invA、crp、asd和INH基因。结果发现,免疫后牛精神和采食正常,在粪便、水和土壤样本中均未检测到invA,crp、asd和INH目的基因,表明肌肉注射抑制素重组菌后,重组菌不会通过牛体向外界传播,不会对环境产生不利影响。3.抑制素基因免疫诱导西门塔尔牛体液免疫应答差异基因的研究依据抗体水平高低,分别采集对照组、免疫应答高和低各3头牛的血液,利用RNA-seq分析差异表达基因,发现免疫高应答组和低应答组间有97个差异表达基因;对照组与低应答组间有198个差异表达基因;而高应答组与对照组间有127个差异表达基因。其中,IFITM1、BOLA-DQA5、BOLA-DQB、IL11RA和TSLP是引起免疫应答差异的关键基因。