IGF2对三阴性乳腺癌的增殖、迁移和侵袭作用及临床相关性分析研究

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[目 的]三阴性乳腺癌(Triple Negative Breast Cancer,TNBC)是乳腺癌中的一种特殊类型,其恶性程度和复发转移风险相较于其他乳腺癌亚型大,患者预后也相对更差,目前的治疗手段仍较为有限。已有多项研究表明,胰岛素样生长因子2(Insulin-like Growth Factor 2,IGF2)与多种癌症的发生、发展、转移及预后相关。本研究以三阴性乳腺癌组织样本以及三阴性乳腺癌细胞系为主要研究对象,探讨IGF2与三阴性乳腺癌的临床相关性及其对三阴性乳腺癌的增殖、迁移和侵袭作用。[方 法]1.样本收集:收集2015年1月至2018年9月于昆明医科大学第一附属医院(本部医院)乳腺外科就诊,未曾行术前新辅助化疗、内分泌治疗、术前放疗及靶向治疗,且术后病理确诊为浸润性乳腺癌(三阴型)的病例52例,术后病理确诊为浸润性乳腺癌(激素受体阳性型)病例12例。2.将所收集的全部石蜡标本通过免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)法检测IGF2在三阴性乳腺癌组织中,以及激素受体阳性乳腺癌组织中的表达情况。3.分析IGF2在三阴性乳腺癌石蜡组织和激素受体阳性乳腺癌组织中的表达,并进一步分析IGF2的表达与TNBC癌患者的年龄、Ki-67表达、TNM分期、腋窝淋巴结转移情况、复发转移情况、流产史等临床特征之间的统计学差异。4.根据免疫组化结果中IGF2的表达,将TNBC患者中表达为-、+、++的归为低表达组,+++归为高表达组,分析IGF2的表达与两组TNBC患者的3年无病生存时间(Disease-free survival,DFS),以及 3 年总生存时间(Overall survival,OS)的关系,并分析可能与TNBC预后相关的因素。5.分别检测梯度浓度的IGF2对乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭作用:(1)CCK8细胞增殖实验检测不同浓度IGF2处理后,三阴性乳腺癌细胞株和激素受体阳性乳腺癌细胞株的增殖能力。(2)细胞划痕实验检测IGF2处理组与对照组三种乳腺癌细胞的迁移能力,测量对照组与实验组的迁移距离并分析各组迁移率之间的差异。(3)通过Transwell实验检测对照组及IGF2处理组三种细胞的迁移和侵袭能力,分别计数各组的穿膜细胞数并分析组间差异。[结 果]1.IGF2在两种乳腺癌组织中的表达结果:免疫组化结果显示,IGF2在三阴性乳腺癌组织及激素受体阳性乳腺癌组织中均有表达,IGF2在三阴性乳腺癌组织中强阳性的比例高于激素受体阳性型乳腺癌组织,两组间IGF2表达差异无统计学意义(P>0.05)。2.TNBC组织中IGF2的表达与各临床指标间相关性分析的结果:通过分析IGF2的表达情况与TNBC患者临床指标间的关系,发现Ki-67值、复发转移、流产史与患者的IGF2表达差异有统计学意义(P<0.05),IGF2表达与TNBC患者的年龄、TNM分期间差异无统计学意义(P>0.05)。3.TNBC中,IGF2高表达组与低表达组的生存分析及预后影响因素分析:通过绘制生存曲线分析TNBC患者中IGF2高表达组与低表达组的3年DFS及OS间的关系,发现两组患者的3年DFS与IGF2的表达情况差异有统计学意义(P<0.05),两组患者的3年OS与IGF2的表达差异无统计学意义(P>0.05)。COX单因素分析显示IGF2与TNBC患者的3年DFS相关(P<0.05),年龄与TNBC患者的3年OS相关(P<0.05),多因素分析均无统计学意义(P>0.05)。4.梯度浓度的IGF2对三种乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭作用的结果:(1)在CCK8细胞增殖实验中,三种乳腺癌细胞的对照组与梯度浓度的IGF2处理组之间差异有一定的统计学意义(P<0.05),各细胞不同浓度组之间的OD值差异无统计学意义(P>0.05)。(2)在细胞划痕实验中,IGF2处理组的三阴性乳腺癌细胞的迁移能力与对照组间差异有一定的统计学意义(24h:P>0.05,48h:P<0.05)(24h:P<0.05,48h:P<0.05)。MCF-7细胞的迁移能力与对照组之间差异无统计学意义(24h:P>0.05,48h:P>0.05)。(3)在 Transwell 迁移实验中,IGF2 处理后的 MDA-MB-231、MDA-MB-468细胞和MCF-7细胞迁移能力与对照组间差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05,P<0.05)。(4)在Transwell侵袭实验中,IGF2处理后的MDA-MB-231细胞,其侵袭能力强于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。IGF2处理后的MDA-MB-468细胞,其侵袭能力与对照组之间差异存在统计学意义(P<0.05),MCF-7细胞的侵袭能力差异无统计学意义(P>0.05)。[结 论]1.IGF2在三阴性乳腺癌组织中强阳性的比例高于激素受体阳性乳腺癌组织,提示IGF2可能与肿瘤恶性程度有关。2.IGF2在有复发转移、Ki-67≥20%、有流产史的TNBC患者中的表达强度与无复发转移、Ki-67<20%、无流产史的TNBC患者存在差异,提示IGF2对三阴性乳腺癌患者的复发转移可能有一定的预测作用。3.IGF2高表达组的TNBC患者与低表达组3年DFS差异有统计学意义,3年OS差异无统计学意义,多因素分析均无统计学意义,提示IGF2对TNBC患者3年DFS可能有一定的研究价值。年龄与IGF2均不可作为TNBC患者预后的独立影响因素。4.IGF2对三阴性乳腺癌细胞和激素受体阳性乳腺癌细胞的增殖能力有一定的促进作用。5.IGF2可能具有促进三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭的作用,但尚需进一步验证。
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