hIL-22基因克隆及其在CHO-K1细胞和E.coli.中的表达

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目的:IL-22又称IL-TIF(IL-10-Related T cell-Derived Inducible Factor)是近来发现的一种新型的细胞因子,由活化的T淋巴细胞产生,最初被描述为IL-9诱生基因.IL-22主要表达在T细胞,尤其是Ⅰ类极化的T细胞,在NK细胞也有少量表达.IL-22由179个氨基酸组成,含4个半胱氨酸,与IL-10有25﹪的序列同源,除此之外IL-22和IL-10共用一个受体亚单位IL-10R2,即IL-22的受体复合体为IL-22R和IL-10R2,IL-10的受体复合体为IL-10R1、IL-10R2.IL-22属IL-10家庭成员,这一家族包括IL-10、IL-22、mda-7/IL-24、IL-19、IL-20和AK155/IL-26.自发现IL-22迄今,研究发现IL-22除可在肝细胞和肝癌细胞系上调其急性期反应蛋白的表达外,还可诱导胰腺细胞表达胰腺相关蛋白PAP1,这表明IL-22在炎症反应中发挥重要作用.IL-22能诱导多种细胞系如肾小球系膜细胞、肺和肠上皮细胞、黑色素瘤细胞、肝癌细胞的STAT活化.目前对IL-22的生物学活性尚未完全了解,因此尽管IL-22与IL-10结构上有相似性,但IL-22的活化和信号传导通路却与IL-6在肝细胞中的反应相似,而且更为重要的是IL-22可使STAT3的第727位的丝氨酸磷酸化,以使转录活性达到极限,这与先前对IL-6的报道相同.所有的研究结果都显示IL-22在炎性反应、免疫反应中可能具有多效性.为更深入地了解这一细胞因子的生物学活性,我们构建人IL-22表达载体pcDNA3/IL-22,并将其转染至CHO-K1细胞中,获得稳定表达IL-22的CHO细胞株,同时构建pBV220/IL-22原核表达载体,获得高表达的菌株,为后续工作奠定基础.结论:通过基因工程技术分别获得了表达hIL-22的真核表达载体和原核表达载体,为后续的研究工作打下基础.初步的实验数据表明,IL-22可以与IL-2,IL-15协同刺激NK-92细胞增殖,增强其细胞毒活性,但是IL-22不能替代IL-2或IL-15以维持NK-92细胞在体外的长期培养.关于IL-22的生物学活性还有待于做进一步的研究.
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