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[目的]
以南海多棘海星为材料,初步筛选具有NKT细胞激活剂特征的活性物质和具有抑制肿瘤细胞生长的活性物质。
[方法]
1.南海多棘海星粉碎后,用无水乙醇提取,旋转蒸发得乙醇提取物。
2.用薄层板层析法确定层析分离的溶剂系统。
3.利用硅胶柱层析分离技术对上述乙醇提取物按照极性进行分离。
4.体内活性分析试验:各组分分别通过腹腔注射小鼠,收集小鼠血清,检测细胞因子IL-4和IFN-r的水平。
5.体外活性分析试验:采用体外细胞毒试验,将不同组分的提取物加入培养的肿瘤细胞中,分析海星提取物不同组分对肿瘤细胞的生长抑制和杀伤作用。
[结果]
1.分别优选了硅胶柱层析分离南海多棘海星乙醇提取物及其组分Ⅲ的溶剂系统。
2.对南海多棘海星乙醇提取物通过硅胶柱层析分离,获取了8个组分(按照Rf值的不同),Rf值分别为1.000、0.916、0.708、0.625、0.516、0.316、0.115、0.000。对其中的组分Ⅲ进一步的硅胶柱层析分离,获取了4个亚组分(按照Rf值的不同),Rf值分别为0.993、0.785、0.486、0.314。
3.体内试验表明,南海多棘乙醇提取物的组分Ⅲ能刺激小鼠产生较高水平的IL-4(p<0.05)、IFN-γ(p<0.05),组分Ⅲ的亚组分中Ⅲ-2、Ⅲ-4也能刺激小鼠产生较高水平的IL-4(p<0.05)、IFN-γ(p<0.05)。
4.体外细胞毒试验显示,南海多棘海星乙醇提取物的组分Ⅷ对肿瘤细胞的生长具有明显的抑制作用。
[结论]
1.用硅胶柱层析技术从南海多棘海星乙醇提取物分离出8个组分,并从其中的组分Ⅲ中进一步分离出4个亚组分。
2.所分离的南海多棘海星乙醇提取物组分Ⅲ及其亚组分Ⅲ-2和Ⅲ-4具有刺激小鼠产生高水平的IL-4和IFN-γ,具有NKT细胞激活剂的作用特性,提示其中可能含有NKT细胞激活剂。
3.所分离的南海多棘海星乙醇提取物组分Ⅷ对Hela细胞、Lovo细胞,CNE-2具有显著的细胞毒活性,提示其中可能含有新的抗肿瘤活性物质。