中药鲜用优效性评价研究 ——以蒲公英为例

来源 :中南民族大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jenny_408
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“神农尝百草一日而遇七十毒”,鲜用是中药的最初形态,也是中医药和民族医药的一大特色;《神农本草经》云“生者尤良”,备言中药鲜用之有效性;古之医者也多有栽植贮备运用中药鲜药的习惯。然而,随着中药运用范围的扩大,加之受鲜药保存和贮运不便等因素的影响,大部分中药被加工成干制饮片或根据其用途进行炮制使用。目前,《中国药典》所载大部分为中药干制品,另有载明鲜品使用者。而实际上大部分中药干品的干制过程仅以“晒干、阴干”等进行描述,这些药物在历代本草记载及现实应用中亦不乏鲜用直接入药且取得良效者;对于这类中药在长时间干制过程中药物的性状、性味、功效、活性成分、药效作用等必然发生变化,那么其药效物质与药效作用相较于鲜品是否减失及程度如何;换言之,中药鲜用的优效性及机制如何,中药鲜用适于哪些功效及哪些药物,其药效物质基础除现今较明确的化学成分外,还有哪些成分或生命活性物质参与,其科学价值及应用价值如何,需要深入开展研究。蒲公英(Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.)为菊科蒲公英属多年生草本植物的全草,常用鲜品或干品入药。其鲜用其具有清热解毒、消痈散结的作用,主治肠痈、肺痈、乳痈、感冒、发烧、咳嗽等。本研究在传统应用背景下开展蒲公英鲜用的药效与作用机制研究,并通过比较医学研究,开展蒲公英鲜汁和蒲公英干品提取物对对乙酰氨基酚(APAP)诱导的肝毒性的肝脏保护作用差异,蒲公英鲜汁和蒲公英干品提取物对葡聚糖硫酸钠(DSS)导致的急性结肠炎治疗作用差异,并进一步阐明蒲公英鲜汁中除常规化学成分以外的其他药物物质及其参与药效作用发挥的机制。为阐明其调节肝损伤及缓解结肠炎的主要药效与可能的作用机制,并为确定主要药效物质基础提供实验依据,本文开展如下研究:(1)蒲公英鲜汁和蒲公英干品提取物对APAP导致的急性肝损伤小鼠的影响;(2)蒲公英多酚(DP)对APAP导致的急性肝损伤小鼠的影响;(3)蒲公英鲜汁和蒲公英干品提取物以及蒲公英外泌体样纳米颗粒对DSS诱导的小鼠结肠炎的影响。主要的研究结果如下:1、本文用过量的APAP诱导小鼠的急性肝损伤模型,对蒲公英鲜汁和蒲公英干品提取物的药效进行比较研究,结果发现两者的预处理均可显着降低血清中丙氨酸转氨酶(ALT),天冬氨酸转氨酶(AST),碱性磷酸酶(AKP),肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)的含量,但蒲公英鲜汁的效果优于蒲公英干品提取物;此外,与APAP组相比,蒲公英鲜汁和蒲公英干品提取物均可改善小鼠体内的氧化应激水平(超氧化物歧化酶,丙二醛,谷胱甘肽酶),降低小鼠体内的炎症反应(肿瘤坏死因子-α,白细胞介素-1β),抑制促炎因子环氧合酶2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的过度表达。同时蛋白印迹的结果也表明两者均可降低JNK蛋白表达并抑制JNK途径的激活来抑制凋亡信号通路的激活。HE染色也表明蒲公英鲜汁和蒲公英干品提取物预处理可显着抑制APAP诱导的肝细胞坏死,炎性细胞浸润和充血。结果表明,蒲公英鲜汁和蒲公英干品提取物可以被用于预防APAP诱导的肝损伤,并且蒲公英鲜汁的效果优于蒲公英干品提取物。本文进一步研究了蒲公英提取物经过分离纯化之后的蒲公英多酚可以呈剂量依赖性的预防APAP过量导致的肝损伤。其也是通过影响小鼠体内的氧化应激平衡,抑制无菌炎症反应和细胞凋亡的产生来预防APAP过量导致的肝毒性。2、通过在饮用水中添加2.5%的DSS来诱导小鼠的结肠炎,通过前期的预实验我们发现,蒲公英外泌体样纳米颗粒在治疗结肠炎的疗效优于蒲公英干品提取物。进一步的研究发现,DELNs可抑制磷酸化c-Jun N末端激酶(JNK),细胞外调节蛋白激酶(ERK),p38,信号转导和转录激活因子3(STAT3)和AKT蛋白的表达。同时,核因子-κB(NF-κB)p65蛋白的表达减少,促炎因子(肿瘤坏死因子-α和白介素-1β)和趋化因子(MCP-1)的基因表达减少。单核细胞趋化蛋白1,CCL5,CXCL9和CXCL10)被抑制。通过抑制Bcl-2,Caspase-8和caspase-9的蛋白表达,肠细胞的凋亡得以减弱。当前的研究结果表明,新鲜蒲公英汁里面里含有除化学成分外其它的药效活性物质起作用即蒲公英外泌体样纳米颗粒(DELNs),其可以通过抑制炎症,减弱细胞凋亡和调节肠道免疫细胞来减轻结肠炎的严重程度并治疗炎症。综上所述,蒲公英鲜汁用于治疗APAP导致的急性肝损伤和DSS导致的急性结肠炎的效果优于蒲公英干品提取物,结果为蒲公英鲜用的基础研究提供了理论依据,也从生命活性物质的角度阐释了鲜药发挥最大临床效能的物质基础,从而为中药鲜药研究与应用开辟新的领域和发展机遇,也为探究中药鲜用/干用/制用差异提供新的科学视角。
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