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仔猪腹泻一直都是现代养殖业面临的巨大挑战之一,卵黄抗体(Immunoglobulin yolk,IgY)作为一种有效的抗生素替代品,能够有效预防仔猪腹泻,提高生长性能。但也有研究发现,在饲料中添加IgY不能提高断奶仔猪的生长性能,这主要是因为IgY在pH低于3.5的条件下会迅速失活,并且胃蛋白酶的存在会加速IgY活性损失。研究发现利用微囊化技术对蛋白质包被,使其在胃中不释放,避免胃液造成蛋白质活性损失,并且在小肠中迅速释放,从而提高其应用效果。本研究利用壳聚糖-海藻酸钠微囊和聚丙烯树脂微囊两种方法对IgY进行包被,优化制备条件,减少IgY在胃液中释放率,提高IgY在肠液中释放率和胃液中的稳定性;同时,利用产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)口服攻毒建立小鼠腹泻模型,验证包被IgY在活体上缓解腹泻的效果。结果如下:1.以本实验室制备的特异性抗ETEC 3FliC全蛋粉为试验材料,利用壳聚糖-海藻酸钠微囊对其包被。首先采用硫酸铵分级沉淀的方式对全蛋粉中的IgY进行纯化,然后利用单因素试验和正交试验相结合的方式对微囊制备过程中主要影响因素(CaCl2浓度、海藻酸钠浓度、壳聚糖浓度和药载比)进行条件优化,考察其对包封率、载药率和在模拟胃液肠液中的释放率的影响。确定微囊最优制备条件为:CaCl2浓度0.5%,海藻酸钠浓度2%,壳聚糖浓度0.3%,药载比8:1。最优条件下制备的微囊包封率达到61.93%,载药率为8.52%;在模拟胃液中处理2h,IgY累积释放率不超过22%;在模拟肠液中处理4h累积释放率达到87%,6h后可以完全释放;ELISA结果显示,IgY-壳聚糖-海藻酸钠微囊能显著提高IgY在模拟胃液中的稳定性,微囊在pH=3.0的模拟胃液处理3h,IgY活性可保持在88%以上。2.以特异性抗ETEC 3FliC全蛋粉为试验材料,利用挤出-滚圆机对全蛋粉进行制粒,以聚丙烯酸树脂Ⅱ号为包衣壁材,利用流化床对全蛋粉进行包被。试验中发现,由于全蛋粉中油脂含量高,在包被过程中油脂析出,颗粒间相互粘连,影响包被效果,而通过添加一定量的白炭黑可以吸附油脂。试验中采用单因素试验考察白炭黑对微丸油脂析出程度的影响,以及淀粉和微晶纤维素对微丸回收率和成型的影响。确定微丸最优组成成分:全蛋粉100g,白炭黑12g,淀粉15g,微晶纤维素8g。然后利用底喷流化床制备4个包衣增重(8%,12%,16%,20%)的微囊,考察包衣增重对聚丙烯酸树脂微囊在模拟胃液肠液中释放率和IgY在胃液中稳定性的影响。结果发现,包衣最优增重为20%,IgY在模拟胃液中1小时内基本不释放,3h累积释放率不超过25%;IgY在模拟肠液中处理1h后基本完全释放;ELISA结果显示,IgY聚丙烯酸树脂微囊能够显著提高IgY在模拟胃液中的稳定性,微囊在pH=3.0的模拟胃液处理2h,IgY活性基本不损失,活性可保持在83%以上。3.利用K88ac ETEC菌株攻毒ICR小鼠建立小鼠腹泻模型,验证全蛋粉微囊缓解小鼠腹泻的效果。结果发现,饲喂特异性全蛋粉能够显著降低攻毒后小鼠的致病率和腹泻次数(P<0.05;P<0.05),攻毒组、中剂量组、高剂量全蛋粉微囊组和未包被全蛋粉组致病率分别为90%、40%、30%和40%,腹泻频率为13 ± 18.07,0.71 ±1.25,1 ± 1.70和1.14±1.67次。饲喂中剂量和高剂量全蛋粉微囊能够显著降低K88ac在小鼠空肠和回肠中的粘附数量(P<0.05;P<0.05)。K88ac攻毒导致小鼠空肠和回肠肠道结构损伤,肠绒毛肿胀断裂,绒毛长度变短(P<0.05;P<0.05);饲喂全蛋粉能够改善肠道结构损伤,显著提高小鼠回肠的绒毛高度/隐窝深度比(P<0.05),其对肠道绒毛损伤断裂情况有所改善,但差异不显著(P>0.05)。综上所述,利用壳聚糖-海藻酸钠微囊和聚丙烯酸树脂微囊对IgY进行包被能够显著提高IgY在胃液中的稳定,并且两种微囊均有着良好的肠溶效果;IgY微囊能够有效缓解ETEC引发的小鼠腹泻,抑制ETEC与肠道粘附,改善肠道结构损伤。本研究为提高IgY在仔猪上应用效果,预防仔猪腹泻提供了一种新的策略。