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壳聚糖酶专一性地水解壳聚糖,生成的壳低聚糖具有独特的生理活性和功能,在医药、食品、化妆品等工业中有着广泛的应用,尤其在海洋生物资源利用方面有着广阔前景.该论文的主要研究内容包括:产壳聚糖酶菌株的初步筛选及鉴定;产壳聚糖酶的假单胞菌株诱变选育;假单胞菌CUY8产壳聚糖酶发酵条件优化;假单胞菌CUY8产壳聚糖酶的分离纯化和酶学特性研究;壳聚糖酶及其水解产物抑菌性能研究.采用透明圈法,通过筛选初步确定了透明圈直径与菌落直径之比较大的几株菌Y2、Y4、Y8为产壳聚糖酶较好的菌株,其中最好的菌株Y8菌落直径为6.0mm,透明圈直径为18.0mm,透明圈直径与菌落直径之比为3.0,酶活力为0.50U/mL.通过生理生化试验,结合菌株形态特征、生理生化特征和生物学特性,初步鉴定菌株Y8与《伯杰细菌鉴定手册》(第九版)上假单胞菌属(Pseudomonas)最相符,可以认为是假单胞菌属的一个种.以假单胞菌Pseudomonas Y8为起始菌株,筛子2-脱氧-D葡萄糖的浓度为5g/L的条件下,采用Co<60>加UV复合诱变,得到高产壳聚糖酶的菌株Pseudomonas CUY8,酶活力达3.1 U/mL,与原始菌株Pseudomonas Y8相比,酶活力提高6.2倍.对假单胞菌Pseudomonas CUY8发酵生产壳聚糖酶的条件优化结果表明,接种量10%,培养时间3天,Pseudomonas CUY8的活菌数最高,此时所产壳聚糖酶活力也达到最大.假单胞菌Pseudomonas CUY8的发酵液经离心后所得粗酶液经30%丙酮沉淀后,采用Sephadex G-25柱层析和Sephadex G-100柱层析进一步纯化.纯化后得到的壳聚糖酶Ⅰ和壳聚糖酶Ⅱ分别经SDS—PAGE和考马斯亮蓝R250染色后,均显示一条染色带,对照相对迁移率(m<,R>)与标准蛋白质分子量的标准曲线,分子量分别为31KD和20.1KD.假单胞菌Pseudomonas CUY8所产的壳聚糖酶对细菌和真菌都有一定的抑制作用,对细菌的抑制作用要优于真菌.浓度为0.1%的壳聚糖酶抑菌能力高于1.0%壳聚糖,抑菌效果比0.1%壳低聚糖的略高.