论文部分内容阅读
目的:自身免疫失调是卵巢早衰(POF)的重要发病因素之一,可表现为外周血调节性T细胞(Treg)及其相关因子的异常。在免疫性POF小鼠模型中使用脂肪间充质干细胞修复卵巢功能,能促使Treg细胞增殖分化。T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子3(Tim-3)参与了Treg细胞的分化和免疫抑制功能,但是否参与了POF的发病未曾报道。本研究探讨了Tim-3对Treg细胞及其相关因子的调控作用在POF患者中的变化规律,以及其在脂肪间充质干细胞修复免疫性POF小鼠模型卵巢时的起到的作用。方法:1)使用ELISA法检测POF组、卵巢功能不全组及对照组女性TGF-β1、IFN-γ及Tim-3水平;2)采用流式细胞术检测三组患者外周血Treg细胞比例及Tim-3在Treg细胞上的表达;3)以小鼠透明带3多肽(pZP3)构建免疫性POF小鼠模型,通过阴道脱落细胞涂片观察小鼠动情周期,ELISA检测小鼠外周血ZP3的表达以鉴定POF模型成功;4)对干细胞组POF小鼠进行脂肪间充质干细胞移植,ELISA法比较正常组、POF组和干细胞组小鼠E2和FSH水平的改变,及细胞因子TGF-β1、IFN-γ的变化情况;5)使用免疫组化法检测小鼠卵巢Tim-3的表达;6)使用流式细胞术检测小鼠脾脏Tim3+CD4+CD25+Treg细胞比例;7)采用Spearman相关性分析方法对Tim-3水平及Tim3+CD4+CD25+Treg细胞及其相关因子进行关联性分析。结果:1)ELISA检测发现,与正常组女性相比,POF组和卵巢功能不全组患者血清E2水平AMH、Tim-3水平显著降低,FSH水平升高。TGF-β1表达下调,而IFN-γ上调,各指标差异均具有统计学意义(P<0.05);2)流式细胞术检测发现,随着卵巢储备功能的下降,三组患者外周血CD4+CD25+Treg细胞和Tim3+CD4+CD25+Treg细胞比例亦随之下降,且与外周血TGF-β水平呈正相关趋势,与IFN-γ水平呈负相关趋势;3)使用小鼠透明带3多肽构建免疫性POF小鼠模型发现,与对照组相比,模型组小鼠动情周期紊乱,血清ZP3和FSH水平明显增高,E2水平降低,卵巢结构和功能改变,模型构建成功。4)干细胞移植后,小鼠血清E2和TGF-β1水平升高,FSH和IFN-γ水平降低,差异具有统计学意义(P<0.05);5)使用免疫组化法检测发现,相比对照组,POF组小鼠卵巢Tim-3水平降低,干细胞移植后表达升高,差异具有统计学意义(P<0.05);6)流式细胞术发现,相比对照组,POF组小鼠脾脏Tim3+CD4+CD25+Treg细胞比例显著降低(P<0.05),干细胞移植后比例升高;7)使用Spearman相关分析显示,小鼠卵巢Tim-3表达量与脾脏Tim3+CD4+CD25+Treg比例呈正相关关系(r=0.728,P<0.01),与血清TGF-β含量呈正相关关系(r=0.700,P<0.01),与血清IFN-γ含量呈负相关关系(r=-0.673,P<0.01)。结论:POF的发病机制可能与Tim-3表达水平下降,Tim3+CD4+CD25+Treg细胞比例随之减少,Treg细胞数量或功能受损,免疫反应增强,导致卵巢炎性改变有关。Treg细胞减少同时造成细胞因子TGF-β1水平降低,IFN-γ水平升高,导致卵巢发育障碍和过度闭锁,进一步促进了POF的发展。ADSCs能够通过促进Tim-3的表达,诱导机体Treg细胞分化增殖,使TGF-β1水平回升,并抑制IFN-γ的分泌,从而改善卵巢储备功能,为POF的治疗提供了新的实验基础和临床思路。