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沙门氏菌病是由沙门氏菌属细菌引起的各种动物和人类疾病的总称,它不仅给畜禽养殖业带来重大损失,而且具有重大公共卫生意义。禽沙门氏菌病包括禽伤寒、鸡白痢和禽副伤寒等。禽副伤寒沙门氏菌感染家禽,很少引起全身性疾病,但此类沙门氏菌常会引起人类的食源性疾病。鸡白痢沙门氏菌和禽伤寒沙门氏菌是危害养鸡业发展的重要病原菌,该类病原菌可通过水平及垂直传播,主要感染3周龄以内的雏鸡,对青年鸡和成年鸡也会造成不良影响,如下痢、产蛋率下降等。尽管禽伤寒和鸡白痢在一些欧美国家已基本根除,但是发展中国家仍然有严重的发病率和死亡率,造成巨大的经济损失。过去常采用抗生素治疗可导致家禽产生多药耐药细菌,且这些多重耐药的病原体可以通过食物链传染给人类。接种疫苗是预防沙门氏菌感染最有效的方法之一。本研究在作者实验室前期分离到的一株禽伤寒沙门氏菌自然弱毒株SG01的基础上（命名为SG01,专利号:ZL201811491200.6）,探索了SG01株针对禽伤寒沙门氏菌和鸡白痢沙门氏菌的交叉保护及SG01的免疫持续期,作为一种弱毒疫苗候选株在实验室试验的结果可行性,这是实验室首次分离鉴定的一株禽伤寒沙门氏菌自然弱毒株,旨在为开发一种天然弱毒的禽伤寒活疫苗奠定基础。1.禽伤寒沙门氏菌自然弱毒疫苗候选株SG01交叉保护效力评估基于实验室前期分离到一株禽伤寒沙门氏菌自然弱毒分离株SG01的安全性等试验结果,我们认为SG01株菌具有作为禽伤寒沙门氏菌弱毒活疫苗候选株的潜力。为满足临床应用的需求,本研究探索了适合SG01株生长的培养基,发现SG01疫苗候选株在SOC培养基中培养速度显著高于普通LB和含2.5%新生牛血清LB培养基。探究禽伤寒沙门氏菌SG01株作为弱毒活疫苗候选株对本型禽伤寒沙门氏菌及同属D群沙门氏菌的鸡白痢沙门氏菌感染的交叉保护效力。本研究挑选50只5日龄雏鸡,并分成5组:免疫组1、禽伤寒沙门氏菌攻毒组1、免疫组2、鸡白痢沙门氏菌攻毒组2和健康对照组,每组10只鸡。免疫组1和免疫组2均通过口服免疫途径方式接种5×109CFU的SG01疫苗候选株,免疫后连续观察临床症状14天并在免疫后第7天和14天称重所有鸡只。免疫后第15天,通过腹腔注射途径,以禽伤寒沙门氏菌U20株（1×1010CFU）对免疫组1和禽伤寒沙门氏菌攻毒组1进行攻毒;以鸡白痢沙门氏菌SP03株（1×1010CFU）对免疫组2和鸡白痢沙门氏菌攻毒组2进行攻毒。攻毒后连续观察14天,并于第15天进行剖检。利用基于临床症状和病理变化的评分系统对攻毒后观察的临床症状（精神沉郁和腹泻症状）以及剖检后的病理变化（心脏、肝脏和脾脏病理变化）进行评分,并通过实验室建立的发病判定标准以确定发病率。结果显示,口服免疫5×109CFU的SG01候选株对鸡群日增重无显著影响,并且不引起鸡群产生精神沉郁和腹泻临床症状。禽伤寒沙门氏菌和鸡白痢沙门氏菌分别攻毒不同组鸡群后,免疫组与攻毒组的鸡群相比,临床症状以及剖检后的病理变化平均评分均显著较低。以禽伤寒沙门氏菌U20株（1×1010CFU）对免疫1组、禽伤寒沙门氏菌攻毒组1进行攻毒,鸡群的发病率分别为30%（3/10）、100%（10/10）;以鸡白痢沙门氏菌SP03株（1×1010CFU）对免疫2组、鸡白痢沙门氏菌攻毒组2进行攻毒,鸡群的发病率分别为50%（5/10）、100%（10/10）。针对禽伤寒沙门氏菌和鸡白痢沙门氏菌的交叉免疫保护试验结果表明,口服免疫禽伤寒沙门氏菌SG01株可在一定程度上预防禽伤寒沙门氏菌及鸡白痢沙门氏菌的人工高剂量感染,期待在家禽生产上起到有效的交叉保护作用。2.禽伤寒沙门氏菌自然弱毒疫苗候选株SG01的免疫持续期效力及抗体检测为了探究禽伤寒沙门氏菌SG01株抗体与其保护效率的关系及免疫之后抗体持续的时间,本试验进行了一次口服免疫SG01株后的抗体监测水平,并评估了免疫后血清抗体水平与攻毒保护效力的对应关系。本研究将160只5日龄SPF鸡分为三部分:免疫组（60只）、攻毒组（50只）、健康对照组（50只）。免疫组分为6组（每组10只）,均于5日龄通过口服免疫方式接种5×109CFU的SG01疫苗候选株。其中5组免疫组鸡群分别在免疫后1、2、3、7和10周,以腹腔注射的方式,攻毒禽伤寒沙门氏菌U20株,攻毒剂量为每只鸡1×1010CFU,攻毒后连续观察14天,并于攻毒后第15天进行剖检,确定发病率。另设1组鸡群不进行攻毒试验,在免疫后1～10周内每周进行采血测定血清抗体凝集效价,血清抗体凝集效价检测利用实验室研发的S9-peg凝集抗原（专利号:ZL202010400163.4）。攻毒保护试验结果显示,免疫后第1周攻毒,免疫组发病率60%（6/10）,攻毒组发病率100%（10/10）;免疫后第2周攻毒,免疫组发病率30%（3/10）,攻毒组发病率100%（10/10）;免疫后第3周攻毒,免疫组发病率10%（1/10）,攻毒组发病率90%（9/10）;免疫后7周攻毒,免疫组发病率0%（0/10）,攻毒组发病率80%（8/10）;免疫后第10周攻毒,免疫组发病率0%（0/10）,攻毒组发病率60%（6/10）。此外,10只仅免疫SG01候选株但不进行攻毒试验的鸡血清抗体凝集效价检测结果显示,免疫后第1周和第2周中未有鸡只检测出抗D群沙门氏菌凝集抗体效价,免疫后第3周有3只鸡（3/10）测出1:1凝集效价滴度,并在免疫后第4周就全部到达1:8凝集效价滴度之后持续升高,于第7周到达峰值为8只鸡（8/10）凝集效价滴度为1:16和2只鸡（2/10）凝集效价滴度为1:8。在第10周有7只鸡（7/10）仍保持1:8的凝集效价滴度,而仅有1只鸡（1/10）未检测出凝集效价滴度。上述结果说明,口服免疫SG01株后第3周即可用S9-peg凝集抗原检测到抗体,且免疫后第3周进行攻毒试验,攻毒保护率为80%,表明鸡只能检测出凝集抗体阳性,鸡群即可有效抵抗禽伤寒沙门氏菌的感染。此外,口服免疫SG01候选株后能提供超过8周的免疫持续期。