【摘 要】
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目的:通过纳米制剂技术,改善丹参酮进入体内后发生的快速分布和广泛消除,从而提升丹参酮的口服生物利用度,最终有效地克服种种机体屏障将丹参酮整体共递送到肿瘤细胞内发挥多组分协同抗肿瘤作用。方法:（1）通过文献调研法和指纹图谱检测并确定丹参酮提取物的指标性成分并进行含量测定;（2）采用薄膜蒸发-高压乳匀技术制备载丹参酮的共递药纳米粒并进行工艺优化,对得到的丹参酮纳米粒进行粒径、电位、多分散性评价,并通过
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目的:通过纳米制剂技术,改善丹参酮进入体内后发生的快速分布和广泛消除,从而提升丹参酮的口服生物利用度,最终有效地克服种种机体屏障将丹参酮整体共递送到肿瘤细胞内发挥多组分协同抗肿瘤作用。方法:（1）通过文献调研法和指纹图谱检测并确定丹参酮提取物的指标性成分并进行含量测定;（2）采用薄膜蒸发-高压乳匀技术制备载丹参酮的共递药纳米粒并进行工艺优化,对得到的丹参酮纳米粒进行粒径、电位、多分散性评价,并通过高效液相色谱仪和葡聚糖凝胶柱法获得该纳米制剂的丹参酮含量及包封率;（3）采用反向透析法考察丹参酮纳米粒在生理和病理环境下的药物释放动力学;（4）构建跨Caco-2上皮细胞屏障模型模拟小肠环境进行丹参酮及其纳米粒的肠单层细胞渗透性研究;（5）大多数药物作用于细胞内部,研究制剂与细胞的相互作用是必要的。制备粒子大小、形态和表面性质与丹参酮纳米粒类似的香豆素纳米粒（C6-NPs）,具有荧光标记的C6-NPs用于进行细胞摄取制剂研究,此外通过增殖抑制实验研究丹参酮及其纳米粒对细胞的毒性作用及其机制;（6）鉴于三维肿瘤球模型具有接近于实体瘤的细胞结构和环境,构建了Hep G2肿瘤球模型,用于评价丹参酮纳米粒的组织渗透性和组织毒性;（7）建立超高效液相色谱串联质谱含量分析方法来探究丹参酮纳米粒的在体药动学,构建小鼠H22皮下移植肝肿瘤模型,研究丹参酮纳米粒的体内抗肿瘤药效。结果与讨论:（1）选取丹参酮中即是药效成分又是含量最高成分的丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ和隐丹参酮作为模型药物,对共递药纳米粒的递药特性进行研究。（2）制备的丹参酮纳米粒呈橙黄色乳液状,粒径范围为144～148nm,Zeta电位在-26～-29m V之间,多分散性为0.11～0.14,为单分散体系。测得共递药纳米粒中各丹参酮成分具有较高的包封率,丹参酮的整体包封率>90%。（3）体外释放研究结果显示当丹参酮被纳米粒共包载后,表现出显著缓释作用。同时丹参酮纳米粒在p H 7.4生理环境、p H 6.8和p H 5.0肿瘤病理环境下都表现出中药多组分异步释放规律。环境p H的改变不影响纳米粒的释药特性,其机制是Fick扩散和骨架溶蚀两种模式共同作用。（4）共递药纳米粒对丹参酮中不同成分具有不同的跨上皮细胞屏障能力,由各成分的渗透量计得纳米粒中整体丹参酮的单位面积渗透量是混悬液的8.97倍,该纳米粒提高了丹参酮的溶解度,具有更强的上皮细胞屏障渗透能力。（5）细胞摄取实验结果显示,5min时C6-NPs组的荧光强度是游离香豆素的20倍,给药时间延长至2h,C6-NPs组仍具有明显的荧光,与游离香豆素组相比,具有显著性差异（P<0.01）,该纳米载体极大促进了细胞对香豆素的摄取。癌细胞增殖抑制实验研究表明,本研究所使用的丹参酮对多种肿瘤细胞系均有抑制作用,而空白纳米粒几乎没有毒性。丹参酮被纳米粒共包载后,仍具有强的肿瘤毒性作用,作用于细胞24、48和72h后,其IC50分别是（7.82±0.38）μg·m L-1、（2.53±0.02）μg·m L-1和（0.01±0.00）μg·m L-1。（6）肿瘤球实验表明即使在三维环境中,制备的纳米粒仍具有强的细胞摄取和渗透性能以及强的肿瘤毒性。与游离香豆素相比,C6-NPs作用4h后在球深部96μm时仍可见微弱荧光存在。游离丹参酮和丹参酮纳米粒分别处理5天后,相对体积变化率R分别为113.20%和96.34%（模型组R为148.00%）,两者具有显著性差异。（7）制备的丹参酮纳米粒在血清中24h内稳定存在,表明血液对共递药纳米粒的影响较小。进行药代动力学研究,结果显示丹参酮经共递药纳米粒包载后,其药时曲线下面积AUC和峰浓度Cmax等关键药动学参数显著升高（P<0.05）,表明丹参酮的生物利用度得到提高,有更长的体内血液循环。体内药效研究显示,丹参酮纳米粒具有一定的肝实体瘤抑制作用和免疫促进作用,有效延长了小鼠的生存期,与游离丹参酮相比,具有更好的整体治疗效果。结论:共递药纳米粒显著提高了丹参酮的口服生物利用度,延长了丹参酮的在体循环时间,增强了肿瘤屏障跨越能力,使其在肿瘤部位发挥多组分协同抗癌作用,具有更好的整体治疗效果。丹参酮类共递药纳米粒为中药纳米制剂的开发提供新思路和新方法。
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