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目的:以高脂饮食诱导的高胆固醇血症模型小鼠为研究对象,观察金钗石斛总生物碱(DNLA)改善模型小鼠肝脏脂肪蓄积的作用,明确DNLA调控小鼠脂肪代谢的机制。方法:C57BL/6雄性小鼠随机分为维持饲料组(n=25)和高脂饲料组(n=47),分别给予普通维持饲料和高脂饲料11周,高脂饲料组小鼠血清中TC水平显著升高,判断高胆固醇血症模型建立成功。建模成功后,将维持饲料组小鼠随机分为正常饮食对照组(CD组)和正常饮食DNLA干预组(CD-DNLA组,15 mg/kg),每组11只,继续给予普通维持饲料喂养。将高脂饲料组小鼠随机分为模型组(HFD组)、DNLA低剂量组(DNLA-L组,5 mg/kg)、DNLA高剂量组(DNLA-H组,15 mg/kg)和辛伐他汀阳性对照组(Simvastatin组,20 mg/kg),每组11只,继续给予高脂饲料喂养。每天1次灌胃给药,持续15周。给药结束后,取血清检测TC的含量,收集肝脏,HE染色观察病理变化。采用RNA-seq分析技术,利用数据挖掘方法,在转录组层面宏观分析DNLA调节脂肪代谢的机制,采用RT-PCR验证基因Sgpp2,Scd1,Scd2,Pla2g4b,Pnpla3,Cpt1b,Etnppl,Pygm,Socs2,Ppp1r3c和Lpin1的表达变化,Western blot验证蛋白LPIN1和SCD1的表达变化。检测肝脏中基因PPARα、PPARδ和PPARγ的表达,最后观察核受体PPARγ的靶基因Lpl、Cd36、Ncor1、Ap1s2和Agps表达的变化。结果:在高脂饮食诱导11周后,成功建立小鼠高胆固醇血症模型,血清中TC的含量显著升高。给予DNLA治疗15周后,与HFD组相比,DNLA-H组小鼠血清TC含量显著下调。肝脏病理切片结果显示,与CD组相比,HFD组小鼠的肝脏出现大量的脂肪变性,细胞核缩小。与HFD组相比,DNLA-L组和DNLA-H组小鼠肝脏的脂肪变性得到明显改善,细胞核圆而清晰。采用RNA-seq技术,通过聚类热图和主成分分析方法,探索与肝脏脂肪代谢相关的371个基因表达的变化。结果发现,DNLA-H组小鼠肝脏脂肪代谢相关基因表达的整体情况与HFD组能够明显区分,而且与CD组相近。通过火山图筛选出11个表达水平受高脂饮食显著影响而DNLA给药后又能显著回调的基因,分别是Sgpp2、Scd1、Scd2、Pla2g4b、Pnpla3、Cpt1b、Etnppl、Pygm、Socs2、Ppp1r3c和Lpin1。RT-PCR验证结果显示,与CD组相比,HFD组基因Pnpla3,Pygm和Scd1的表达显著下调,与HFD组相比,DNLA-H组基因Lpin1的表达水平显著降低,而基因Pnpla3,Ppp1r3c,Scd1和Socs2的表达水平显著升高。Western blot验证结果显示,与CD组相比,HFD组SCD1和LPIN1蛋白表达水平显著下降,DNLA-H组LIPIN1蛋白的表达同样显著下调。与HFD组相比,DNLA-H组SCD1蛋白表达水平显著升高。与HFD组相比,DNLA-H组PPARγ基因表达水平显著升高。与HFD组相比,DNLA-H组中PPARγ靶基因Lpl、Cd36、Ncor1、Ap1s2和Agps的表达水平均显著上升。结论:本研究初步证明金钗石斛总生物碱能够降低高脂饮食诱导的高胆固醇血症模型小鼠的血脂水平,改善肝脏的脂肪蓄积,其作用机制可能是通过激活肝脏PPARγ核受体,提高靶基因表达,达到调节脂肪代谢的作用。