【摘 要】
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最新的研究表明：PAK4和Mig-2两种基因与肿瘤的形成与发展密切相关。制备针对PAK4和Mig-2的单克隆抗体，是为了对肿瘤的诊断，治疗提供依据。利用原核表达的PAK4和Mig-2蛋白作
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最新的研究表明：PAK4和Mig-2两种基因与肿瘤的形成与发展密切相关。制备针对PAK4和Mig-2的单克隆抗体，是为了对肿瘤的诊断，治疗提供依据。利用原核表达的PAK4和Mig-2蛋白作抗原包被酶标板，对经典间接ELISA方法的各个反应参数作了探索，其中包括酶标反应板均一性的测定、PAK4和Mig-2原核表达蛋白最适包被浓度和HRP-标记的羊抗鼠二抗最佳工作浓度、PAK4和Mig-2原核表达蛋白抗原包被条件的确定、封闭液的确定、封闭时间的确定、被检血清最佳稀释度的确定、待检血清反应时间的确定、酶标二抗反应时间的确定、底物反应时间的确定、间接ELISA方法阴阳临界值的确定，通过分析得到了一组稳定可靠的参考数据。建立了适合PAK4和Mig-2单抗制备实验的间接ELISA筛选方法。
然后用重组的PAK4和Mig-2质粒(以P3XFLAG-CMV-10表达质粒为载体)免疫6-8周龄健康BALB/C雌性小鼠，通过细胞融合与克隆，筛选出了能稳定分泌PAK4单克隆抗体的杂交瘤细胞2株，分别命名为2D1和3H4；同时也筛选出3株Mig-2单抗细胞株，分别命名为1F8、3C4和4H2株。用间接ELISA方法测得PAK4两株单抗腹水的效价可达1：1.0×104，Mig-23株单抗的效价介于1：2.4×104～1：4.8×104之间。用间接ELISA方法鉴定，1F8((Mig-2)、3H4(PAK4)、3C4(Mig-2)、4H2(Mig-2)4株单抗均为IgM类抗体，而2D1(PAK4)为IgG类抗体。免疫组化试验显示PAK42株单抗2D1、3H4均与临床病例中的乳腺癌组织管状上皮细胞高度反应，证明2株单抗的特异性较好。
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