【摘 要】
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前列腺癌是男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤,目前每年全球有一百三十多万新发病例,且部分地区发病率持续上升,前列腺癌已严重威胁着男性的身心健康。近些年来,转录组测序技术迅速发展,为前列腺癌早期诊断、治疗提供新的研究途径。前期的文献阅读我们发现RAB2A在细胞内参与调控物质囊泡运输,RAB2A在乳腺癌、口腔癌中促进肿瘤发展,同时结合RAB2A在前列腺癌组织与正常前列腺组织的表达差异。我们认为RAB2A
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前列腺癌是男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤,目前每年全球有一百三十多万新发病例,且部分地区发病率持续上升,前列腺癌已严重威胁着男性的身心健康。近些年来,转录组测序技术迅速发展,为前列腺癌早期诊断、治疗提供新的研究途径。前期的文献阅读我们发现RAB2A在细胞内参与调控物质囊泡运输,RAB2A在乳腺癌、口腔癌中促进肿瘤发展,同时结合RAB2A在前列腺癌组织与正常前列腺组织的表达差异。我们认为RAB2A可能在前列腺癌的发生、发展中起作用,可能为前列腺癌的诊断、治疗、预后判断带来新的靶点。目的:探究敲低RAB2A表达对前列腺癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响,研究敲低RAB2A表达引起的前列腺癌细胞转录组变化,为前列腺癌诊断、治疗、预后寻找新的靶点。方法:1.质粒瞬时转染构建RAB2A低表达的前列腺癌细胞系;2.实时荧光定量PCR以及蛋白免疫印迹实验检测质粒转染效率;3.平板克隆形成实验检测细胞增殖能力变化;4.Transwell迁移实验、划痕愈合实验检测细胞迁移、侵袭能力变化;5.高通量测序技术进行转录组测序,筛选出敲低RAB2A表达后相较于阴性对照组的差异表达基因;6、GO、KEGG富集分析寻找差异基因富集特点;7、实时荧光定量PCR对测序所得主要差异基因进行验证。结果:1.通过实时荧光定量PCR以及蛋白免疫印迹实验检测发现siRNA敲低后,RAB2A表达显著降低;2.平板克隆形成实验表明:敲低RAB2A表达后,PC3细胞系、DU145细胞系相同时间内形成的克隆数都明显低于未敲低对照组;3.细胞划痕实验表明:敲低RAB2A表达后,PC3细胞系以及DU145细胞系划痕愈合率明显低于对照组;Transwell迁移实验表明:敲低RAB2A表达后,PC3细胞系以及DU145细胞系24小时细胞迁移量明显少于对照组;4.转录组测序结果提示前列腺癌细胞株PC3敲低RAB2A表达后,相较于阴性对照组,总共有MMP9在内的128个差异表达基因,其中有62个基因表达上调,66个基因表达下调;5.差异表达基因GO富集分析,在生物过程中主要富集到初级代谢过程、细胞含氮化合物代谢、细胞增殖复性调控;细胞组分中主要富集到线粒体基质以及细胞外基质;分子功能中富集到离子结合、碳水化合物衍生物结合等部分;KEGG富集分析中,差异基因主要富集在甾体合成、脂肪细胞信号因子、AMPK信号通路、Relaxin信号通路、IL-37信号通路、氨基酸tRNA生物合成等过程;6.实时荧光定量PCR实验结果与转录组测序结果一致。结论:1.RAB2A对前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭起促进作用;2.RAB2A敲低后引起前列腺癌PC3细胞系基因表达谱变化,引起MMP9在内的多个基因差异表达。
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