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第一部分、发育期暴露甲基化抑制剂对其后代小鼠行为学的影响 目的：研究小鼠（F0）发育期暴露DNA甲基化抑制剂5-氮杂胞苷（5-Azaytidine，5-Aza）对其后代（F1）小鼠的行为学的影响，探索DNA甲基化模式变化的可遗传性。 方法：在发育期F0小鼠给予5-Aza，待其成年后，分为以下四组配对繁殖：即对照组雌性×对照组雄性（组1，对照组）、5-Aza高剂量组雌性×对照组雄性（组2）、对照组雌性×5-Aza高剂量组雄性（组3）、5-Aza高剂量组雌性×5-Aza高剂量组雄性（组4）。待其后代成年后进行高架十字迷宫实验（EPM）、旷场实验（OFT）、明暗箱实验（LDB）、糖水偏好实验（SPT）、强迫游泳实验（FST）、悬尾实验（TST）来观察其后代小鼠的行为学变化。 结果：在EPM中，5-Aza后代小鼠进入封闭臂的次数较对照组减少（P<0.0l），在封闭臂的停留时间较对照组增加（P<0.01）；组4雄性后代小鼠进入开放臂的次数及停留时间较对照组减少（P<0.05），组2后代雄性小鼠进入开放臂的次数减少（P<0.05），组3后代雄性小鼠在开放臂停留时间减少（P<0.05），组3、组4雌性后代小鼠进入开放臂的次数及停留时间较对照组减少（P<0.05）；在OFT中，5-Aza后代小鼠穿过中心区域的次数和直立次数较对照组减少（P<0.01）；在LDB中，与对照组相比，5-Aza后代小鼠明箱停留时间减少（P<0.01），除组2雄性小鼠外，其余各组雄性小鼠穿箱次数较对照组增加（P<0.01），雌性小鼠与对照组无统计学差异；在SPT中，与对照组相比，组4、组2雄性后代小鼠糖水偏好率降低（P<0.01，P<0.05，各自的）；在FST中，5-Aza后代小鼠累积不动时间较对照组延长（P<0.01）；在TST中，与对照组相比，5-Aza后代小鼠累积不动时间延长（P<0.01）。 结论：本课题组前期的研究发现，小鼠在发育期暴露于5-Aza能引起成年后焦虑抑郁样行为。本实验进一步发现在发育期暴露于5-Aza，可引起其后代小鼠焦虑抑郁样行为。我们的结果表明，DNA甲基化模式的变化可遗传给后代，从而引起其行为学异常。 第二部分、发育期暴露甲基化抑制剂对其后代小鼠HPA轴的影响 目的：通过研究后代小鼠对下丘脑-垂体-肾上腺（hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA）轴的影响，探讨发育期期给予5-Aza小鼠后引起后代小鼠焦虑抑郁样行为的机制，为神经精神疾病治疗提供新思路和靶点。 方法：小鼠在发育期暴露于5-Aza，待其后代小鼠完成行为学测试后，处死小鼠，取血和脑组织，用ELISA法测定各后代小鼠前额皮质、海马中脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）、5-甲基胞嘧啶（5-methylcytosine content,5-mC）、糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor,GR）、盐皮质类固醇受体（mineralocorticoid receptor,MR）浓度的变化；RT-PCR法检测前额皮质、海马中BDNF、DNA甲基转移酶1（DNA methyl transferase，Dnmt1）、GR、促肾上腺皮质激素释放激素（corticotropin releasing hormone，CRH）、11β-羟类固醇脱氢酶1（11β-Hydroxysteroid dehydrogenase，11β-HSD1）的mRNA水平变化；Western-Blot法检测前额皮质、海马中BDNF、Dnmt1、GR、CRH、11β-HSD1的蛋白表达。 结果：ELISA法结果显示，与对照组相比，给以5-Aza后，其后代小鼠BDNF在海马及血中的表达水平下降（P<0.01），组2、组3雌性后代小鼠BDNF在前额皮层含量较对照组下降（P<0.05），其余各组小鼠BDNF在前额皮层的含量较对照组减少（P<0.01）；5-Aza后代小鼠5-mC在前额皮层及海马部位中的表达程度较对照组下降（P<0.0l）；组2、组3、组4后代小鼠GR在前额皮层和海马的表达程度较对照组明显增加；组2雌性后代小鼠MR在前额皮层的表达较对照组上升（P<0.05），其余组后代小鼠MR在前额皮层的含量较对照组明显增加（P<0.01），组4雄性后代小鼠、组3雌性后代小鼠、组4雌性后代小鼠MR在海马的表达程度较对照组上升（P<0.0l），组3雄性后代小鼠MR在海马表达水平较对照组增加（P<0.05）。RT-PCR结果显示，5-Aza后代小鼠前额皮层及海马Dnmt1 mRNA水平较对照组明显减少（P<0.01）；5-Aza后代小鼠在前额皮层及海马BDNF mRNA水平较对照组减少（P<0.01）；组2、组3、组4后代小鼠在前额皮层GR mRNA水平较对照组增加（P<0.05，P<0.01各自的），各组小鼠海马GR mRNA水平较对照组明显增加（P<0.01）；5-Aza后代小鼠前额皮层及海马中的11β-HSD1mRNA水平较对照组明显增加（P<0.01）。组2雄性后代小鼠前额皮层CRH mRNA水平较对照组增加（P<0.05），其余组小鼠前额皮层CRH mRNA水平较对照组明显增加（P<0.01），各组小鼠海马部位CRH mRNA水平较对照组增加(P<0.01）。Western blot结果显示给予5-Aza后，后代小鼠在前额皮层及海马中的Dnmt1蛋白表达水平较对照组明显下降（P<0.01）；组2雌性后代小鼠海马BDNF含量较对照组明显减少（P<0.01），其余各组后代小鼠前额皮层及海马中的BDNF含量较对照组下降（P<0.01）；5-Aza后代小鼠前额皮层及海马GR表达较对照组明显增加（P<0.01）；组2、组3、组4后代小鼠前额皮层及海马部位11β-HSD1的含量较对照组增加（P<0.01）；组2、组3、组4后代小鼠前额皮层及海马部位CRH表达水平较对照组明显增加（P<0.01，P<0.05，P<0.01，各自的）。 结论：我们的结果表明，发育期小鼠暴露甲基化抑制剂5-Aza引起其后代小鼠行为学改变，可能是通过改变BDNF、Dnmt1以及HPA轴通路上的GR、CRH、MR、11β-HSD1等基因的甲基化模式，进而影响它们的表达程度，导致神经发生发育异常，引起神经精神症状。