论文部分内容阅读
目的：研究自噬上调剂和自噬下调剂对于化疗药物5-FU诱导的胃癌MGC803细胞增殖、自噬和凋亡的影响，探讨其对胃癌MGC803细胞的化疗增敏作用及相关机制。方法：选用人胃癌MGC803细胞，分别予5-FU、自噬上调剂RAD001、自噬下调剂Bafilomycin a1、5-FU与自噬上调剂RAD001联合、5-FU与自噬下调剂Bafilomycin a1联合干预，并设置对照组分别作用24h、48h、72h，采用MTT法测定各组对胃癌MGC803细胞增殖的抑制情况，MDC荧光染色法观察胃癌MGC803细胞自噬囊泡的发生情况，免疫荧光法观察自噬特异性微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1lightchain3，LC3)在胃癌MGC803细胞中的表达；采用Annexin V-PI双染检测胃癌MGC803细胞凋亡情况；应用Western blot检测胃癌MGC803细胞中自噬相关蛋白Beclin1，p62及组织蛋白酶CathepsinB的表达；实时荧光定量RT-PCR检测胃癌MGC803细胞中自噬相关基因ATG7，ATG12，溶酶体相关膜蛋白基因Lamp-2的表达情况。结果：5-FU组、5-FU和RAD001联合组以及5-FU和Bafilomycin a1联合组对胃癌MGC803细胞的生长具有明显抑制作用。其中，5-FU和Bafilomycin a1联合组对细胞增殖抑制作用最显著，24h、48h、72h的抑制率分达到32.06%±3.25%，70.15%±2.36%和89.75%±2.76%，显著高于其余干预组，差异具有统计学意义(P<0.05)。MDC染色和免疫荧光观察LC3蛋白结果显示：随着时间延长（24h、48h、72h）RAD001和Bafilomycina1分别提高和减少了胃癌细胞内的自噬囊泡及LC3蛋白的表达；5-FU和RAD001联合组的细胞自噬囊泡及LC3蛋白表达明显高于其余各干预组；5-FU和Bafilomycin a1联合组自噬囊泡及LC3蛋白表达显著减少。Annexin V-PI双染检测细胞凋亡显示：5-FU与Bafilomycin a1联合干预组的胃癌MGC803细胞早期凋亡率显著高于其余干预组，差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测各组胃癌MGC803细胞自噬相关蛋白显示：5-FU与Bafilomycin a1联合干预组的胃癌MGC803细胞中，Beclin1表达显著减少，P62、CathepsinB显著增多，与其余各组相比，差异具有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测胃癌MGC803细胞中自噬相关基因显示：5-FU与Bafilomycin a1联合组的MGC803细胞中ATG7、ATG12、Lamp-2的mRNA表达量均有明显下调，低于其余干预组，差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：Bafilomycin a1下调细胞自噬，明显增强胃癌细胞对5-FU化疗的敏感性，这种化疗协同作用的机制可能与抑制胃癌细胞的保护性自噬，影响溶酶体功能，促进细胞凋亡有关。