Notch1信号对神经胶质瘤U251细胞粘附和迁移的影响及其机制的研究

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:pankun001
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目的:1、观察Notch1基因对人类神经胶质瘤细胞U251的粘附和迁移能力的影响;2、探讨Notch1基因影响U251细胞粘附和迁移能力的机制。方法:1、利用Notch1-shRNA和pNL-NICD/EGFP慢病毒感染人胶质瘤U251细胞,RT-PCR和Western Blotting法筛选和鉴定Notch1表达下调或Notch1胞内段(Notch1 intracellular domain, NICD)表达上调的U251细胞。2、通过纤连蛋白(Fibronectin,Fn)细胞粘附试验、划痕试验观察各组细胞的粘附和迁移情况。3、应用RT-PCR和Western blotting法检测各组细胞中N-cadherin、αN-catenin和β-catenin基因的表达,分析Notch1对三者的影响。4、采用免疫共沉淀的方法检测N-cadherin、αN-catenin和β-catenin三者的相互关系。结果:1、Notch1-shRNA慢病毒表达载体能有效下调U251细胞Notch1的表达,而pNL-NICD/EGFP慢病毒表达载体能显著上调U251细胞NICD的表达。2、通过Fn试验、划痕试验观察到,Notch1下调的细胞粘附力显著增强,迁移力明显减弱;而NICD上调的细胞粘附力明显下降,而迁移力显著增强。3、Notch1下调和NICD上调的细胞N-cadherin、β-catenin的mRNA和蛋白的表达与对照组比较均无明显变化。而在Notch1下调细胞中,αN-catenin mRNA和蛋白的表达与对照组相比明显增加,在NICD上调的细胞中αN-catenin mRNA和蛋白的表达与对照组相比显著降低。4、利用β-catenin抗体进行的免疫共沉淀实验,能够同时检测到N-cadherin和αN-catenin,用αN-catenin抗体进行免疫共沉淀,也能够同时检测到N-cadherin和β-catenin。结论:1、Notch1基因与人神经胶质瘤U251细胞的粘附、迁移能力密切相关。Notch1下调的细胞粘附力显著增强,迁移力明显减弱;而NICD表达上调的细胞粘附力减弱,迁移能力增强。2、在神经胶质瘤U251细胞中,N-cadherin、αN-catenin和β-catenin三个蛋白之间存在相互作用。Notch1信号可能通过上调αN-catenin的表达水平,影响cadherin/catenin复合体从而改变U251细胞的粘附和迁移能力。
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