论文部分内容阅读
目的:高血压是一种低度炎症性疾病,且免疫系统参与了高血压的发生发展,而免疫细胞间缝隙连接参与了炎症反应过程。NO供体作为一种降压药,已广泛应用于临床,其具有抗炎作用。本研究主要探讨NO是否通过外周血T淋巴细胞上连接蛋白来调控免疫炎症反应进而缓解高血压造成的靶器官损害。方法:在体实验:选用12周龄的自发性高压大鼠(Spontaneous Hypertension Rat,SHR)和Wistar京都(Wistar-Kyoto,WKY)大鼠,分为WKY组、SHR组和SHR+NO组,每组8只,SHR+NO组按10μg/(kg·d)腹腔注射硝普钠4周,WKY组和SHR组等量生理盐水腹腔注射4周,运用BP-6无创血压测量仪测量大鼠尾动脉收缩压;应用HE染色技术观察大鼠脑基底动脉和肾脏病理学的改变;应用流式细胞术检测大鼠外周血中T淋巴细胞亚群及T淋巴细胞上连接蛋白40(Connexin40,Cx40)的表达变化;应用ELISA技术检测大鼠外周血血浆中细胞因子(IL-17、IL-2、IL-6、TNF-α和IL-10)的表达。离体实验:在无菌条件下提取SHR和WKY大鼠外周血淋巴细胞进行培养,分为WKY组、SHR组和SHR+NO组,SHR+NO组给予200μM NO干预48 h,WKY组和SHR组给予等量生理盐水孵育48 h,观察三组细胞数目的变化,采用流式细胞术和Western blot技术检测三组淋巴细胞Cx40的表达,应用ELISA技术检测细胞培养上清液中IL-6和TNF-α的表达。结果:(1)SHR尾动脉收缩压显著高于WKY大鼠(P<0.01,n=8),SHR+NO组尾动脉收缩压显著低于SHR组(P<0.01,n=8)。(2)与WKY组比较,SHR组大鼠血浆中IL-17、IL-2、IL-6和TNF-α表达升高(P<0.01,n=8),IL-10表达降低(P<0.01,n=8),SHR+NO组较SHR组IL-17、IL-2和TNF-α表达降低(P<0.01,n=8),IL-6表达降低(P<0.05,n=8),IL-10表达升高(P<0.05,n=8)。(3)与WKY组比较,SHR组大鼠出现脑基底动脉内皮细胞受损、血管壁增厚、肾小球萎缩和炎性细胞浸润等炎性损伤现象,SHR+NO组较SHR组大鼠炎性损伤程度减轻。(4)SHR组大鼠外周血CD3+表达频率高于WKY组(P<0.01,n=8),SHR+NO组CD3+T细胞表达频率低于SHR组(P<0.05,n=8)(5)与WKY组比较,SHR组大鼠外周血CD4+T细胞表达频率和CD4+/CD8+的比值升高(P<0.01,n=8),CD8+T细胞表达频率下降(P<0.05,n=8),CD4+CD25+T细胞表达频率下降(P<0.01,n=8),SHR+NO组较SHR组CD4+T细胞表达频率和CD4+/CD8+的比值降低(P<0.05,n=8),CD8+T细胞和CD4+CD25+T细胞表达频率升高(P<0.05,n=8)。(6)SHR组CD4+Cx40+表达频率显著高于WKY组(P<0.01,n=8),SHR+NO组CD4+Cx40+表达较SHR组降低(P<0.01,n=8);SHR组CD8+Cx40+表达频率显著高于WKY组(P<0.05,n=8),SHR+NO组CD8+Cx40+表达频率较SHR组降低(P<0.05,n=8)。(7)原代培养SHR组T淋巴细胞上Cx40的表达频率显著高于WKY组(P<0.05,n=6),SHR+NO组T淋巴细胞上Cx40的表达频率显著低于SHR组(P<0.05,n=6)。(8)原代培养SHR组T淋巴细胞Cx40的表达量显著高于WKY组(P<0.05,n=3),SHR+NO组T淋巴细胞Cx40的表达量显著低于SHR组(P<0.05,n=3)。(9)在细胞培养上清液中,SHR组IL-6和TNF-α的表达水平较WKY组均升高(P<0.05,n=6),SHR+NO组IL-6和TNF-α的表达水平较SHR组均降低(P<0.05,n=6)。结论:SHR脑血管、肾脏发生炎性损伤,并伴随外周血T细胞亚群和细胞因子分泌紊乱;NO可下调外周血T淋巴细胞上Cx40的表达;NO可能是通过抑制外周血T淋巴细胞上Cx40的表达来调节细胞因子释放进而缓解高血压造成的靶器官损伤。