核转录因子SATB1介导Snail/Slug信号通路调控上皮间质转化(EMT)促进膀胱移行细胞癌进展

来源 :华中科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liaoquanya
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目的:探讨AT富集序列特异结合性蛋白1(SATB1)及EMT标志基因mRNA和蛋白在人膀胱细胞移行上皮癌的表达,同时评估SATB1表达与EMT的相关性,探讨SATB1在膀胱癌上皮间质转化(EMT)的调控机制。方法:分别采用Real time RT-PCR、免疫组织化学、Western blot技术检测膀胱癌、癌旁正常粘膜组织标本中的SATB1、上皮细胞标记基因E-cadherin、间质细胞标记基因vimentin及EMT调节基因的表达,取膀胱癌组织中心作为标本,并取远离癌组织正常膀胱黏膜组织作为对照组。Spearman秩次相关分析法分析SATB1与EMT调节基因之间的相关性,Pearson卡方检验或Fisher’s exact检验分析SATB1和膀胱癌临床因素的相关性,单因素分析采用Kaplan-Meier检验分析SATB1在膀胱癌患者的预后意义,多因素分析采用COX风险比例模型检验分SATB1在膀胱癌患者的预后风险。结果:Western blot和实时定量RT-PCR均显示膀胱癌组织中SATB1、Snail,、Slug和Vimentin较正常膀胱组织表达增高,E-cadherin表达较正常膀胱组织降低,免疫组织化学显示SATB1、Snail、Slug和Vimentin蛋白表达阳性率分别为64.4%67.2%62.8%,71.2%,而E-cadherin为12.1%,与Western blot和实时定量RT-PCR结果相符。SATB1mRNA高表达与膀胱癌患者年龄(P=0.034)、肿瘤浸润深度(P<0.001)、TNM分期(P=0.015)、淋巴结转移状态(P=0.013)及远处转移(P=0.012)等临床病理特征之间密切相关。Spearman秩次相关分析表明SATB1高表达与EMT相关标记基因相关,SATB1表达与Snail、Slug和Vimentin之间呈明显正相关,而与E-cadherin之间则呈显著负相关。此外,SATB1高表达患者5年生存率较SATB1低表达患者显著降低,SATB1是膀胱癌预后独立危险因素。结论:SATB1与EMT相关基因明显相关,SATB1在膀胱癌EMT机制中可能起着重要的作用,SATB1有可能成为治疗进展性膀胱癌的一个新的靶标。目的:观察核转录因子SATB1及EMT标志基因在不同侵袭性膀胱癌细胞系BIU-87和T24中的表达,观察SATB1过表达和基因沉默对膀胱癌细胞增殖、凋亡及侵袭能力等细胞生物学的影响,探讨SATB1过表达是否诱导膀胱癌EMT发生。方法:分别应用Real-time RT-PCR、Western blot与免疫荧光染色检测不同膀胱癌细胞系中SATB1和EMT标志基因的表达并分析评估SATB1表达与EMT的相关性;通过建立SATB1过表达(BIU-87)和SATB1基因沉默(T24)细胞模型,观察SATB1过表达和SATB1基因沉默对细胞形态学的影响及EMT调控基因Snai1、Slug、E-cadherin和Vimentin的差异性表达,并采用CCK-8比色法、Transwell侵袭实验和细胞周期和凋亡实验评估SATB1基因调控对膀胱癌细胞增殖、周期、凋亡和侵袭等细胞生物学的影响。结果:结果显示,在高侵袭性膀胱癌细胞珠T24中SATB1、Snail、Slug和Vimentin表达水平显著高于其在低侵袭膀胱癌细胞BIU-87中的表达(P<0.001),而E-cadherin表达却明显低于BIU-87细胞;成功构建pcDNA3.1-SATB1过表达和pGenesil2-SATB1-shRNA干扰质粒后,在低侵袭膀胱癌细胞BIU-87建立SATB1过表达模型,免疫荧光发现,细胞形态由卵圆形形态变成长纺锤状形态,呈典型的EMT形态学改变,并且发现细胞间E-cadherin明显减少;而在高侵袭性膀胱癌细胞T24建立SATB1基因沉默细胞模型,结果发现细胞形态由长纺锤状形态变回卵圆形形态,逆转EMT形态学改变,同时发现细胞间E-cadherin明显增多;Real-time RT-PCR和Western blot结果发现,pcDNA3.1-SATB1组细胞SATB1、Snai1、Slug和Vimentin表达水平显著上调,而E-cadherin表达却明显下调,同时发现膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭能力明显增强,而进入G0/G1期细胞比率明显低于阴性对照组与空白对照组,而进入S期细胞比率显著高于阴性对照组与空白对照组(*P<0.05),结果显示SATB1表达上调明显促进BIU-87细胞周期进程,但对细胞凋亡影响不明显(P>0.05);在pGenesil2-S ATB1-shRNA组细胞SATB1、Snai1、Slug和Vimentin表达水平显著下调(*P<0.05),而E-cadherin却显著上调(*P<0.05),同时发现细胞增殖、迁移和侵袭能力明显降低(*P<0.05)。此外我们还发现进入G0/G1期细胞比率明显高于阴性对照组与空白对照组,而进入S期细胞显著低于阴性对照组与空白对照组(*P<0.05),SATB1表达下调明显抑制T24细胞周期进程,但对细胞凋亡无明显影响;Spearman秩次相关分析表明SATB1表达与Snai1、Slug和Vimentin之间呈显著正相关,而与E-cadherin之间则呈明显负相关。结论:SATB1异常高表达促进膀胱癌细胞增殖、细胞周期、细胞迁移和侵袭,但对细胞凋亡无明显影响。SATB1可能通过促进Snai1、Slug表达上调而抑制E-cadherin表达进而诱导EMT的发生,可能在膀胱癌进展过程中起着重要的作用。
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