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中文摘要目的阐明肝癌患者外周血及局部浸润Treg细胞的临床意义,同时探讨TLR4在调节肝癌Treg细胞免疫功能中的作用,并阐述肝癌细胞与免疫细胞之间相互作用机制。方法收集2008年3月至10月在华中科技大学同济医学院附属协和医院肝胆外科中心首次住院且行根治性手术切除的I、ⅡI和III期肝细胞型肝癌患者60例的临床病理资料和血清、肝癌组织标本。术后病理证实均为肝细胞型肝癌。采用流式细胞术、免疫组织化学技术和Western blot技术分别检测患者外周血及组织标本中CD4+CD25+Treg、CD4+CD25high Treg、CD4+CD25highFOXP3+Treg细胞的表达量及外周血细胞因子TNF-α、IL-10和TGF-β1的水平,同时检测肿瘤组织和肝癌细胞系TLR4表达变化。然后将CD4+CD25highFOXP3+Treg细胞水平变化和患者临床资料及TLR4表达之间做相关性分析。建立TRANSWELL肝癌细胞和巨噬细胞共培养模型,用LPS刺激肝癌细胞表面TLR4,检测巨噬细胞分泌细胞因子水平的变化,包括TNF-α、IL-10和CCL22。结果肝细胞癌患者外周血中Treg细胞的表达水平与健康志愿者相比明显增高。免疫组织化学和Western blot显示肿瘤组织内FOXP3+Treg细胞表达增高。肝癌患者外周血中IL-10水平较健康志愿者显著增高。人肝癌细胞系HepG2和鼠肝癌细胞系H22均表达TLR4,且肿瘤组织中富含TLR4蛋白。相关性分析提示,外周血CD4+CD25highFOXP3+Treg细胞高表达率与肝癌多灶性及TLR4蛋白高水平表达相关。离体细胞共培养实验显示,LPS预刺激H22细胞后会上调巨噬细胞RAW246.7高表达IL-10和CCL22,而TNF-α的表达变化不大。提示肝癌细胞会利用巨噬细胞分泌—些细胞因子,建立有利于逃避免疫监视的局部环境。结论肝癌患者外周血中Treg细胞表达增高,同时肝癌组织内FOXP3+Treg细胞和TLR4蛋白表达也增高。相关性分析和离体细胞实验提示肝癌细胞表面TLR4能够通过肿瘤周围浸润的巨噬细胞间接富集FOXP3+Treg细胞到肿瘤局部,并且有利于肿瘤的肝内转移。激活肿瘤表面的TLR4信号通路会增强FOXP3+Treg细胞的免疫抑制功能,有利于肿瘤的生长和发展。因此推测肝癌细胞通过自身TLR4信号通路影响肿瘤浸润巨噬细胞分泌细胞因子,参与调节FOXP3+Treg细胞的抑制功能,构建有利于自身生长、发展的微环境。