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目的: 通过体外研究，观察PON1基因过表达对敌敌畏致小鼠膈肌细胞损伤的保护作用，并研究其保护机制。 方法: 实验一:构建携带PON1基因的慢病毒载体，通过观察绿色荧光以确定慢病毒载体的转染效率，并用RT-PCR、Western blot法检测PON1mRNA和蛋白的表达情况，进一步验证过表达载体的构建。常规培养小鼠膈肌细胞，转染过表达慢病毒载体，将细胞分为正常对照组，敌敌畏(DDVP)组，LV-GFP+DDVP组，LV-PON1+DDVP组，CCK-8法检测细胞存活率、流式细胞术检测细胞的凋亡情况，RT-PCR及Western blot法检测小鼠膈肌细胞PON1的表达情况。实验二:常规培养小鼠膈肌细胞，转染过表达慢病毒载体，将细胞分为正常对照组，敌敌畏(DDVP)组，LV-GFP+DDVP组，LV-PON1+DDVP组，ELISA法检测细胞乙酰胆碱酯酶(AchE)水平、血红素氧合酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)，RT-PCR、Western blot法检测小鼠膈肌细胞核因子NF-E2相关因子水平(Nrf2)的表达情况，化学比色法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力及丙二醛(MDA)水平。 结果: 实验一: (1)过表达慢病毒载体的验证:荧光显微镜下观察小鼠膈肌细胞中绿色荧光蛋白的表达情况，慢病毒载体的转染率达到80％以上。RT-PCR、Western blot法结果显示小鼠膈肌细胞在转染LV-PON1后PON1mRNA和蛋白表达明显升高，与空白对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)。 (2)80μ mol/L DDVP诱导24h可明显抑制小鼠膈肌细胞的生长，生存率为82.1％，并呈现剂量依赖性。160umol/LDDVP诱导小鼠膈肌细胞6、12、24h后，细胞的存活率分别为76.1％、66.5％、53.6％，呈时间依赖性。 (3)PON1基因过表达对DDVP诱导后小鼠膈肌细胞PON1mRNA及蛋白表达的影响:与正常对照组相比，160umol/L DDVP诱导24h后， DDVP组和LV-GFP+DDVP组PON1 mRNA及蛋白的表达水平降低，差异均有统计学意义(P＜0.05);与DDVP组相比，LV-PON1+DDVP组PON1 mRNA和蛋白的表达水平显著增高，差异有统计学意义(P＜0.05)。 (4)PON1基因过表达对DDVP诱导后小鼠膈肌细胞生存率的影响:160μ mol/L DDVP诱导小鼠膈肌细胞，各组细胞生长受抑制的程度具有时间依赖性。诱导24h，各组细胞的生长明显受抑，与正常对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)。PON1基因过表达能明显抵抗DDVP对小鼠膈肌细胞生长的抑制作用，与相应时间点DDVP组和LV-GFP+DDVP组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。 (5)PON1基因过表达对小鼠膈肌细胞凋亡率的影响:PON1基因过表达能抑制DDVP诱导所致小鼠膈肌细胞的凋亡，与DDVP组相比，LV-PON1+DDVP组细胞的凋亡率减少。 实验二: (1)PON1基因过表达对DDVP诱导小鼠膈肌细胞后AchE水平的影响:160umol/L DDVP诱导后，各组细胞AchE水平在各个时间点均下降，且呈时间依赖性。与正常对照组相比，DDVP组和LV-GFP+DDVP组细胞AchE水平降低，差异有统计学意义(P＜0.05);LV-PON1+DDVP组AchE水平明显高于DDVP组，差异有统计学意义(P＜0.05)。 (2)PON1基因对DDVP诱导后小鼠膈肌细胞氧化应激指标的影响:与正常对照组相比，各时间点DDVP组和LV-GFP+DDVP组SOD、CAT活力降低，MDA含量升高，差异具有统计学意义(P＜0.05);LV-PON1+DDVP组SOD、CAT活力明显高于DDVP组，MDA含量明显低于DDVP组，差异有统计学意义(P＜0.05)。 (3)PON1基因过表达对DDVP诱导小鼠膈肌细胞后Nrf2mRNA和蛋白表达的影响:DDVP诱导24小时后，LV-PON1+DDVP组Nrf2 mRNA和蛋白的表达升高，与DDVP组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)。 (4)PON1基因过表达对DDVP诱导小鼠膈肌细胞后HO-1和NQO-1水平的影响:与相应时间点DDVP组相比，LV-PON1+DDVP组HO-1、NQO-1的水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论: 1、PON1基因过表达能有效保护小鼠膈肌细胞，降低DDVP对细胞生长的抑制作用，减少凋亡。 2、PON1基因过表达对急性DDVP中毒小鼠膈肌细胞损伤的保护作用可能是通过减轻AchE抑制水平，诱导Nrf2表达发挥抗氧化作用，降低氧化损伤的程度来实现的。