【摘 要】
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肺癌是世界上最常见的癌症之一,肺癌病人大约占癌症死亡总数的18.4%。表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）目前被广泛应用于非小细胞肺癌（NSCLC）的临床治疗,肺癌病人适用EGFR-TKI作为一线治疗的主要指标是EGFR发生激活突变。在治疗过程中大约50%病人对EGFR-TKI药物耐受,肿瘤进一步发展恶化。MET激酶活化目前被认为是EGFR-TKI耐药机制之一,HGF刺激或MET
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肺癌是世界上最常见的癌症之一,肺癌病人大约占癌症死亡总数的18.4%。表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）目前被广泛应用于非小细胞肺癌（NSCLC）的临床治疗,肺癌病人适用EGFR-TKI作为一线治疗的主要指标是EGFR发生激活突变。在治疗过程中大约50%病人对EGFR-TKI药物耐受,肿瘤进一步发展恶化。MET激酶活化目前被认为是EGFR-TKI耐药机制之一,HGF刺激或MET扩增途径均能导致MET激活,进而介导EGFR-TKI耐药。越来越多的证据表明表观遗传异质性在肿瘤药物耐药中发挥重要的作用,然而表观遗传异质性是否通过影响MET表达进而驱动EGFR-TKI耐药目前还不得而知。目的:为了揭示组蛋白甲基转移酶EZH2是否能够介导非小细胞肺癌EGFRTKI耐药,阐明EZH2在EGFR-TKI耐药中的作用机理;并寻找合适的解决方案来逆转耐药,给肺癌患者提供精准治疗的可能性,最终为解决非小细胞肺癌耐药提供临床指导。方法:本论文通过构建非小细胞肺癌吉非替尼耐药株模型,经过6个月的药物压力筛选,获得了HCC827/HCC827GR和PC9/PC9GR耐药株。首先检测耐药株里EZH2水平,进而在敏感株里构建sh EZH2敲低细胞株来探究EZH2在吉非替尼耐药中的作用机制。采取EZH2抑制剂GSK343处理来检测细胞对吉非替尼的敏感性变化和相关蛋白水平变化。应用PI3K-AKT抑制剂联合吉非替尼处理来检测EZH2及MET分子变化,进一步确定“MET-AKT-EZH2”负反馈轴在耐药中的作用。同时给予荷瘤小鼠AKT抑制剂联合吉非替尼处理,确定二者是否发挥协同抗肿瘤效应。通过收集非小细胞肺癌临床样本,检测EZH2和MET分子水平的相关性,综合分析EZH2是否和EGFR-TKI耐药相关。结果:我们发现吉非替尼敏感细胞HCC827和PC9里EZH2水平显著高于耐药株HCC872GR和PC9GR细胞。我们在敏感株HCC827和PC9细胞里敲低EZH2后发现能介导吉非替尼耐药,并且细胞增殖速率和克隆形成能力也得到大幅度提升,同时敲低EZH2后MET本底和磷酸化水平均上调。CHIP结果也显示EZH2和H3K27m3能富集在MET基因的启动子区域,同时发现EZH2抑制剂GSK343能增强吉非替尼耐药。通过抑制MET或AKT通路能够上调EZH2水平,进而回复耐药细胞对EGFR-TKI敏感性。另外我们通过MET过表达或者HGF刺激达到激活MET-AKT通路后,EZH2水平发生下调并增加了磷酸化EZH2水平,同时也证明了AKT能在丝氨酸21位点磷酸EZH2。AKT抑制剂联合EGFRTKI能阻断“MET-AKT-EZH2”轴,进而达到逆转肿瘤耐药,细胞实验和动物实验上均验证了此结果。我们发现在临床病人里EZH2和MET表达水平负相关,并且和EGFR-TKI耐药相关。结论:综合这些结果,我们能够得出结论EZH2通过负调控MET参与了EGFR-TKI耐药,“MET-AKT-EZH2”负反馈轴能够增强EGFR-TKI耐药状态,采取阻断“MET-AKT-EZH2”轴的措施能够恢复EGFR-TKI敏感性,进而在小鼠荷瘤实验上也验证了AKT抑制剂联合EGFR-TKI药物能够逆转耐药,发挥协同抗肿瘤效应。在临床上EZH2有潜力作为生物标记物来预测EGFR-TKI敏感性。创新点:本论文探索性发现组蛋白甲基转移酶EZH2能够负调控MET激酶表达,进而促进细胞对EGFR-TKI耐药。同时指出EZH2抑制剂在临床上抗肿瘤应用应慎重评估其安全性。首次提出MET-AKT-EZH2调控环路能够增强肿瘤EGFR-TKI耐药稳定性。通过AKT抑制剂GDC0941联合吉非替尼能够发挥协同抗肿瘤效应,此联合方案对临床治疗具有潜在指导意义。
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