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本研究通过比较获得有效的分离奶牛乳腺上皮细胞的方法,并证明所获细胞具正常生理特征及功能,从而初步建立奶牛乳腺上皮细胞体外培养体系。在建立培养体系的基础上,分别添加亚油酸、维生素A作用于细胞,初步研究其影响作用。第一部分以泌乳奶牛乳腺组织和乳汁为材料分别用组织块接种法、机械破碎法、消化培养法、乳汁分离法分离乳腺上皮细胞,对所获得的细胞经原代培养后进行细胞形态学比较。结果表明,组织块接种法与乳汁分离法获得细胞,两种方法得到的细胞的形态以鹅卵石型和多角型为主,增殖融合有典型的乳头状结构和圆顶型结构,并有泌乳现象。组织块接种法的乳腺上皮细胞15d开始增殖,30d可长满培养皿底部,但纯度不高,需经常做纯化处理;乳汁中分离的细胞4-6d就开始增殖,无成纤维细胞混杂,上皮型细胞纯度高,15d可长满培养皿,而且是获得乳腺上皮细胞的有效方法。第二部分对所获得的原代乳腺上皮细胞进行传代培养,并对其生物学性状及乳腺上皮细胞特异性标志蛋白进行检测,用以证明所获得的细胞为正常生长并有一定生物学功能的乳腺上皮细胞。通过细胞生物学性状检测,细胞接种存活率达到81%;细胞生长曲线呈典型的“S”形,符合细胞生长的一般生物学规律;细胞群体倍增时间最短达48.7h;所获得的细胞直径大小差异显著(组织块接种法比乳汁分离法大5μm)。经过对细胞标志性蛋白-角蛋白18进行免疫组化检测和对细胞特异性分泌蛋白-酪蛋白进行SDS-PAGE(翻译水平)、RT-PCR(转录水平)的检测,证明培养获得的细胞为乳腺上皮细胞,且具有正常分泌乳蛋白功能,初步建立了奶牛乳腺上皮细胞的体外培养体系。第三部分利用建立的培养体系,研究、探讨了亚油酸、维生素A对体外培养的奶牛原代乳腺上皮细胞增殖情况的影响。用MTT法检测细胞生长活性。亚油酸浓度≥10umol/L时,能延缓细胞增殖而亚油酸浓度增至400umol/L时,可抑制细胞正常的生长状态。维生素A(全反式视黄酸)浓度≥15ng/ml时,明显抑制细胞生长,使细胞处于相对生长停滞阶段。由试验可见,通过建立的培养体系而获得乳腺上皮细胞进行添加因子的处理试验,可初步建立乳腺上皮细胞的试验模型,用于泌乳机制相关的研究工作。