【摘 要】
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目的:研究小檗碱对干眼眼表损伤的治疗作用及其机制。方法:本实验通过0.2%东茛菪碱皮下注射联合干燥环境方法建立实验动物干眼模型。实验前期将实验小鼠分为六组,分别为正常组,干眼组,溶剂组,以及0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml三个浓度梯度小檗碱局部点眼治疗组（每组6只小鼠）,应用酚红棉线法和俄勒冈绿色右旋糖酐（Oregon Green Dextran,OGD）染色观察各组小鼠泪液分泌量和角
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目的:研究小檗碱对干眼眼表损伤的治疗作用及其机制。方法:本实验通过0.2%东茛菪碱皮下注射联合干燥环境方法建立实验动物干眼模型。实验前期将实验小鼠分为六组,分别为正常组,干眼组,溶剂组,以及0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml三个浓度梯度小檗碱局部点眼治疗组（每组6只小鼠）,应用酚红棉线法和俄勒冈绿色右旋糖酐（Oregon Green Dextran,OGD）染色观察各组小鼠泪液分泌量和角膜屏障功能,筛选小檗碱最佳治疗浓度。确定小檗碱最佳治疗浓度后,选择最佳浓度作为小檗碱给药组,通过过碘酸希夫染色（Periodic Acid Schiff,PAS）观察各组结膜杯状细胞密度;原位TUNEL染色观察角膜上皮细胞凋亡;免疫荧光和Western Blotting检测角膜上皮屏障功能标志物MMP-3,MMP-9、结膜中细胞凋亡标志物Caspase-8以及结膜中CD4 阳性T细胞的侵润;qRT-PCR检测结膜中干眼相关炎症因子（IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-17、IFN-γ、TNF-α）;Western Blotting观察NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果:局部小檗碱治疗均可有效增加小鼠泪液分泌量,保护角膜上皮屏障功能,且以2mg/ml小檗碱治疗组效果最佳。小檗碱局部应用逆转了干眼导致的结膜杯状细胞密度减少,抑制了角膜上皮中MMP-3,MMP-9的表达,有效缓解了角膜和结膜上皮细胞的凋亡,抑制了 CD4+T细胞侵润和其介导的炎症因子IL-17、IFN-γ在眼表的表达,并可通过抑制NF-κB信号通路中IKK、NF-κB、IκB蛋白的活化发挥其抗炎作用。结论:局部应用小檗碱可通过抑制NF-κB信号通路激活及CD4阳性T细胞介导的眼表炎症,有效的逆转干眼小鼠的眼表损伤,恢复其泪液分泌。
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