【摘 要】
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目的:观察低氧、低温、低氧联合低温条件对大鼠骨骼肌细胞脂肪代谢的影响,讨论不同条件下脂肪代谢分解及β氧化代谢的关键酶HSL、CPT1A以及AMPKPGC-1α信号通路在其中的作用。方法:选取SPF级雄性SD大鼠,分离腓肠肌,原代培养大鼠骨骼肌细胞,用免疫组化法（IHC）鉴定骨骼肌细胞,随机分为对照组（21%氧浓度,37℃）、低温组（21%氧浓度、28℃）、低氧组（1%氧浓度、37℃）、低氧低温组（
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目的:观察低氧、低温、低氧联合低温条件对大鼠骨骼肌细胞脂肪代谢的影响,讨论不同条件下脂肪代谢分解及β氧化代谢的关键酶HSL、CPT1A以及AMPKPGC-1α信号通路在其中的作用。方法:选取SPF级雄性SD大鼠,分离腓肠肌,原代培养大鼠骨骼肌细胞,用免疫组化法（IHC）鉴定骨骼肌细胞,随机分为对照组（21%氧浓度,37℃）、低温组（21%氧浓度、28℃）、低氧组（1%氧浓度、37℃）、低氧低温组（1%氧浓度,28℃）四组,培养48h后,观察细胞形态改变,透射电镜下观察细胞核与线粒体形态及大小的变化,油红O染色观察脂肪代谢情况,用RT-qPCR法及Western Blot法分别检测HSL、CPT1A、AMPK、pAMPK、PGC-1α、UCP-1的mRNA表达量以及蛋白表达水平,分析AMPK-PGC-1α信号通路对脂肪代谢的调控作用。结果:（1）骨骼肌细胞为梭形,细胞核位于中央,胞质向两侧伸展。透射电镜结果提示低氧、低温、低氧联合低温条件促进大鼠骨骼肌细胞的脂肪分解代谢。（2）不同处理条件对脂肪代谢关键酶的影响:（1）低氧、低温、低氧联合低温条件促进大鼠骨骼肌细胞脂肪分解关键酶HSL mRNA的表达（P＜0.05）,低氧联合低温条件促进大鼠骨骼肌细胞HSL蛋白的表达（P＜0.05）。（2）低温条件促进大鼠骨骼肌细胞脂肪β氧化关键酶CPT1A mRNA的表达（P＜0.05）,低温、低氧联合低温条件抑制大鼠骨骼肌细胞CPT1A蛋白的表达（P＜0.05）。（3）不同处理条件对AMPK-PGC-1α通路的影响:（1）低温、低氧联合低温条件促进大鼠骨骼肌细胞AMPK mRNA的表达（P＜0.05）,低氧、低温、低氧联合低温条件对大鼠骨骼肌细胞AMPK蛋白的表达无明显影响,（P＞0.05）,低温、低氧联合低温条件抑制大鼠骨骼肌细胞p AMPK蛋白的表达（P＜0.05）。（2）低氧、低温、低氧联合低温条件促进大鼠骨骼肌细胞PGC-1αmRNA的表达（P＜0.05）,低温、低氧联合低温条件抑制大鼠骨骼肌细胞PGC-1α蛋白的表达（P＜0.05）。（3）低氧、低温、低氧联合低温条件促进大鼠骨骼肌细胞UCP1 mRNA的表达,抑制大鼠骨骼肌细胞UCP1蛋白的表达（P＜0.05）。结论:低氧、低温条件对骨骼肌细胞的脂肪分解代谢具有一定的促进作用,其中的机制之一可能是通过影响AMPK-PGC-1α及其下游促进脂肪分解的关键酶而发挥作用。
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