转座子在耐多药产ESBLs大肠埃希菌中的分布性探讨

来源 :泸州医学院 西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qiuxue6
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目的:探讨转座子在耐多药产ESBLs酶大肠埃希菌中的分布及耐药相关性。方法:1.初筛试验:根据美国国家临床实验室标准委员会(TheNational Committee for clinical Laboratory Standards, NCCLS)推荐的纸片扩散法(kerby-Bauer纸片扩散法)[1]检测71株大肠埃希菌中头孢噻肟(CTX)、头孢他啶(CAZ)、头孢曲松(CS)、氨曲南(AZT)的耐药性,即抑菌环直径≤22 mm的为头孢他啶;抑菌环直径≤25mm的为头孢曲松;抑菌环直径≤27 mm的为氨曲南或头孢噻肟;所符合以上标准的定为初筛可疑产ESBLs菌株。2.纸片确认试(Confirmatory tests)[2]:对纸片扩散法所得可疑ESBLs菌株,同时进行药敏试验,每一组药物中加入头孢他啶加克拉维酸和头孢他啶、头孢噻肟加克拉维酸和头孢噻肟,观察在加克拉维酸前后的抑菌环直径变化≥5mm可确认为产ESBLs菌株。3.药敏试验:采用NCCLS推荐的纸片扩散法(Kerby-Bauer法,K-B法)[3],首先采用对大肠埃希菌标准菌株ATCC 25922进行质控,再对选定的三类中共6种常用抗菌药物:头孢噻肟(CTX)、链霉素(S)、阿米卡星(A)、左氧氟沙星(LEV)、环丙沙星(CIP)、头孢西丁(FOX)在71株大肠埃希菌耐药性分别进行测定。4.PCR技术:大肠埃希菌的DNA,采用Biospin细菌基因组DNA试剂盒所提取。根据已知的转座子Tn21、Tn501、Tn1、Tn2、Tn3、Tn1000、Tn1548分别设计七对引物,在所得到转座子遗传标记物为阳性的菌株中以大肠埃希菌DNA为反应模板分别进行PCR扩增,阳性扩增长度分别为:Tn21为317 bp; Tn501为373 bp;Tnl为497bp;Tn2为479bp;Tn3为323bp;Tn1000为372bp;Tn1548为497bp;将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳、紫外线检测仪观察结果。5.基因测序:分别提取所测转座子DNA扩增阳性的菌株的PCR扩增产物用核酸定量仪测得DNA浓度>300ug/ml,并送至上海生工生物技术公司进行基因测序[4]。结果:1.产ESBLs菌株:在71株大肠埃希菌中通过纸片法初筛后再行确认试验,共检出产ESBLs34株(49.30%)。2.药敏结果:6种抗生素的敏感性在71株大肠埃希菌中全部分布为:耐多药45株(63.38%)、双耐8株(11.27%)、单耐11株(15.49%)、全敏感7株(9.86%)。3.转座子的检出情况:71株细菌中含转座子Tn21、转座子Tn501阳性菌共15株,转座子Tnl、Tn2、Tn3、Tn1000、Tn1548均未检出。3.1转座子在不同耐药模式中的分布:45株耐多药菌株含耐多药转座子菌株13株(28.89%),8株双耐药菌株含转座子双耐药菌株1株(12.50%),11株单耐药菌株含转座子单耐药菌株1株(9.09%),7株敏感耐药模式中未检出。整体比较CMH X2=4.56 p=0.032;耐多药与(双耐药+单耐药+全敏感)比较X2=4.44 p=0.0350。3.2转座子在产ESBLs酶菌株与非产ESBLs酶中的分布:35株产酶菌含转座子的14株(40%),36株非产酶菌含转座子的4株(11.11%);该组X2=10.372 p=0.001。3.3不同转座子模式在各种耐药模式中的分布:转座子Tn21检出7株,其中耐多药6株(85.71%)、双耐0株(0%)、单耐1株(12.5%);转座子Tn501检出5株,耐多药4株(80%);双耐1株(20%)Tn21与Tn501重叠3株(100%),均为耐多药;3.4不同转座子模式在产ESBLs酶菌株与非产ESBLs酶中的分布:转座子Tn21检出7株,其中产ESBLs酶菌株7株(100%),非产ESBLs酶0(O%)株;转座子Tn501检出5株,其中产ESBLs酶菌株1(20%)株,非产ESBLs酶4株(80%);Tn21与Tn501重叠3株,其中产ESBLs酶菌株3株(100%),非产ESBLs酶未检出;该组整体比较X2=10.909 p=0.004,转座子在产酶菌株中具有统计学意义。3.5转座子Tn21与Tn501分别在耐药模式中的分布:转座子Tn21检出10株中耐多药9株(90%)、单耐药1株(10%)、双耐药与全敏模式均为检出;转座子Tn501检出8株中耐多药7株(87.5%)、双耐药1株(12.5%);全敏与单耐模式均未检出。3.6转座子Tn21与Tn501分别在ESBLs酶与非产ESBLs酶中的分布:转座子Tn21检出10株,产酶10(100%)株、非产酶0株;转座子Tn501检出8株,产酶4株(50%)、非产酶4株(50%);精确概率法p=0.023具有统计学意义。结论:1.本地区经临床分离大肠埃希菌中的转座子主要以Tn21与Tn501形式存在,主要分布在耐多药埃希菌中。2.转座子菌株中在产酶与非产酶中均分布,尤其以产ESBLs酶的检出率大于非产ESBLs酶的检出率,提示转座子与ESBLs酶有相关性。3、转座子Tn21与Tn501可重叠存在见于耐多药大肠埃希菌。
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