目的：　　1.了解温州医学院附属第一医院2007年～2010年间临床分离的三种常见的肠杆菌科细菌的分布情况及耐药特性，为临床抗菌药物选择提供依据。　　2.研究2007年～2010年质粒介导喹诺酮耐药的qnr基因在不同肠杆菌科细菌中的分布情况，及qnr阳性株的质粒特性和流行播散情况，为临床耐药株的监控提供依据。　　方法：　　1.回顾性调查2009年～2010年临床分离的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和2007年～2010年临床分离的阴沟肠杆菌临床感染和药敏情况，分析不同肠杆菌科细菌的耐药性。　　2.PCR筛选肠杆菌科细菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因(qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS)，阳性产物进行DNA测序和blast比对以确定基因型。　　3.对qnr基因阳性菌株进行接合转移试验，探讨qnr基因的可转移性;琼脂稀释法检测接合子的MIC，比较不同耐药基因水解喹诺酮类药物的差异性。　　4.对阴沟肠杆菌中检出率较高的qnrB阳性株，利用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)分析其同源性及流行播散情况。　　结果：　　1.2009年～2010年301株大肠埃希菌的主要来源于尿液标本，占47.2％(142株)，其次为血液22.9％（69株）和痰液11.0％（33株）;2009年～2010年145株肺炎克雷伯菌的标本来源以痰液标本为主，占51.7％(75株)，其次为尿液19.3％（28株）和血液9.7％（14株）;2007年～2010年173株阴沟肠杆菌的标本来源以痰液标本占首位，为43.4％（75株），其次为尿液16.2％(28株)和血液9.2％（16株）。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌在监护病房和外科病房的检出率较高，存在较明显的病区集中趋势。　　2.对大肠埃希菌、阴沟肠杆菌和肺炎克雷伯菌以亚胺培南抗菌活性最为明显;其次，大肠埃希菌对哌拉西林/他唑巴坦（敏感率94.7％）和头孢哌酮/舒巴坦（敏感率87.2％）较敏感，肺炎克雷伯菌对头孢西丁（敏感率91.7％）、左旋氧氟沙星（敏感率83.4％）、头孢哌酮/舒巴坦（敏感率83.4％）和哌拉西林/他唑巴坦（敏感率82.1％）较敏感，阴沟肠杆菌对头孢哌酮/舒巴坦（敏感率80.7％）、左氧氟沙星（敏感率73.4％）和环丙沙星（敏感率70.3％）相对较敏感。耐药率最高的是氨苄西林，常见的三种肠杆菌科细菌对氨苄西林的耐药率均超过90％。　　3.qnr基因的检出:301株大肠埃希菌中共检出qnr阳性菌株14株，其中2株同时携带两种基因，qnrA、qnrB、qnrS基因分别检出5株、2株、9株;145株肺炎克雷伯菌中共检出qnr阳性菌株17株，其中1株同时携带两种基因，qnrA、qnrB、qnrS基因分别检出1株、11株、6株;173株阴沟肠杆菌中共检出qnr阳性菌株57株，其中3株同时携带两种基因，qnrA、qnrB、qnrS基因分别检出14株、36株、10株;所有菌株中均未检出qnrC和qnrD基因，不同肠杆菌科细菌中qnr基因型别存在差异。　　4.大肠埃希菌中，qnr基因阳性和阴性株细菌对左氧氟沙星耐药率无统计学差异;肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌中，qnr基因阳性和阴性株细菌对左氧氟沙星耐药率有统计学差异。　　5.接合转移试验结果显示，14株qnr基因阳性的大肠埃希菌有4株体外接合成功;17株qnr阳性肺炎克雷伯菌有3株体外接合成功;57株qnr阳性阴沟肠杆菌有26株体外接合成功。大部分接合子对喹诺酮类药物的MIC有不同程度的提升，但呈低水平耐药，其中2株阴沟肠杆菌接合子呈现较高水平耐药。　　6.选取qnrB阳性检出率较高的阴沟肠杆菌36株，利用PFGE技术分析其同源性，发现有少数菌株存在同源性，大多呈散发流行趋势。　　结论：　　1.临床分离的肠杆菌科细菌大多来源于泌尿道感染、呼吸道感染和血液感染，且主要集中于监护病房和外科病房等科室。　　2.临床分离肠杆菌科细菌耐药严重，对不同抗菌药物呈现不同程度的耐药现象，仅对少数抗菌药物敏感性较高，对大多数抗菌药物有较高的耐药性，尤其是对青霉素类和头孢菌素类药物。　　3.2007年～2010年我院临床肠杆科细菌中存在qnr阳性菌株的流行。不同菌种中qnr基因型种类存在差异，总体以qnrB为主，其次为qnrS、qnrA。本研究以不考虑耐药背景的肠杆菌科细菌为研究对象，系统地检测qnr基因，并证实qnr基因在喹诺酮类耐药和敏感菌株中均存在，喹诺酮类药物敏感菌株中qnr基因的检出值得关注。　　4.接合转移实验结果显示，qnr基因可通过其所在质粒进行水平转移以增加细菌的耐药率。　　5.本院检出的携带qnrB基因比例最高的阴沟肠杆菌大多无同源性，呈散发流行趋势。