猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的猪的一种急性胃肠道疾病,可引起新生仔猪发生呕吐,急性水样腹泻等症状,致死率可高达100%。在2010年以前,该病在我国呈散发状态,2010年末发生大规模的爆发,给我国养猪业带来巨大的经济损失。由于变异毒株的出现,传统疫苗不能有效预防该病,临床上也没有有效的抗病毒药物用于治疗,因此加强候选疫苗株的筛选和抗病毒药物的研究对该病的防控具有重要意义。本研究通过体外实验筛选到有效抑制猪流行性腹泻病毒增殖的药物松萝酸（（+）-Usniacin）,证明其在病毒复制过程中发挥抗病毒作用,并初步证明了其抗病毒作用可能与细胞自噬有关。同时,为了培育弱毒毒株,本研究将实验室分离的N基因部分缺失毒株SH株在Vero细胞上进行连续传代,传至100代,并进行全基因组测序和分析,发现该病毒在细胞传代中逐渐适应细胞,并保持一定的遗传稳定性。本研究为猪流行性腹泻病毒的预防和治疗的研究奠定了基础。1松萝酸对猪流行性腹泻病毒复制的作用及其机制研究为了研究松萝酸对猪流行性腹泻病毒的作用及其作用机制,首先用CCK-8测定了松萝酸对Vero细胞的无毒性浓度,结果显示浓度低于15μM时对细胞无毒性作用。然后采用剂量依赖法测定松萝酸对猪流行性腹泻病毒的抑制作用,通过Western blotting、qRT-PCR、间接免疫荧光的方法检测后发现随着松萝酸作用浓度的升高,对猪流行性腹泻病毒复制的抑制效果增强。为探究松萝酸对猪流行性腹泻病毒不同毒株是否均具有良好的抑制效果,选取猪流行性腹泻病毒经典毒株CV777、变异毒株YZ、缺失毒株SH进行药物的抗病毒实验,结果发现松萝酸对猪流行性腹泻病毒不同毒株均具有良好的抑制效果。通过在猪流行性腹泻病毒复制的不同阶段加入松萝酸发现该药物主要在猪流行性腹泻病毒的复制阶段发挥病毒抑制作用。为了研究该药物可能的抗病毒作用机制,通过Western blotting检测LC3蛋白的表达,结果发现猪流行性腹泻病毒感染Vero细胞后会促进细胞的自噬过程,松萝酸作用于Vero细胞以后可抑制细胞的自噬过程,这预示松萝酸的抗病毒作用可能与细胞自噬有关。本研究首次揭示了（+）-Usniacin的抗猪流行性腹泻病毒作用并发现其抗猪流行性腹泻病毒机制可能与细胞的自噬过程有关,为猪流行性腹泻病毒的治疗研究奠定了基础。2猪流行性腹泻病毒SH株细胞培养和遗传稳定性分析为获得猪流行性腹泻病毒致弱毒株,本研究将实验室前期分离并保存的猪流行性腹泻病毒SH株在Vero细胞上由81代传至100代,测定其基因序列和TCID50,将其基因序列与原始病毒基因序列进行比较分析,并与20代、40代、60代、80代病毒的TCID50进行比较,分析遗传稳定性和细胞适应性。结果显示SH株在连续传代过程中病毒滴度逐渐升高,增殖速度变快。SH株基因组全长28002bp,在连续传代过程中未发生插入与缺失,共发生18处碱基突变,其中5’UTR 1处、ORF1a 6处、ORF 1b 5处、S基因4处、E基因与N基因各1处。其余基因在连续传代过程中未发生突变,呈保守遗传,并且在最初分离SH株时发现的N基因连续36nt的缺失在连续传代的过程中高度保守。本研究为猪流行性腹泻病毒的疫苗株的筛选奠定了基础。