近年来,对于天然食源纳米胶粒的研究日益增多。与化学合成纳米颗粒相比,天然食源纳米胶粒具有更好的生物相容性,更低的环境毒害性,更绿色的制备方法以及更广泛的药物应用前景等优点。河蚬汤中富含粒径70nm左右的胶粒,性质稳定且具有护肝、降脂、抗氧化等明确的生物活性。虽然基于超滤和色谱的手段可以分离这种纳米颗粒,但存在耗时、分离介质容易造成颗粒性质改变等缺陷。因此本研究以河蚬汤为实验对象,利用毛细管区带电泳,建立快速无损分离分析河蚬汤纳米胶粒的方法。此外,巨噬细胞也可视为天然颗粒物质而被毛细管电泳法分离。本研究考察了巨噬细胞的毛细管电泳行为,优化了相应的分离条件,并尝试进行河蚬汤及其纳米胶粒与巨噬细胞的相互作用分析。主要内容和研究结果简述如下:1.以毛细管区带电泳法直接、快速分离河蚬汤中的纳米胶粒,并通过与超滤、透析、尺寸排阻色谱法分离纯化的河蚬汤纳米胶粒进行比较,确认了毛细管电泳直接分离的有效性和保真性。2.优化河蚬汤纳米胶粒的毛细管电泳定量分析方法,提高了纳米胶粒与汤中其他成分的分离效率。最佳电泳条件为:波长214 nm,分离电压20kV,运行缓冲液50 mmol/L硼酸-硼砂缓冲液(pH=8.7)。当纳米胶粒浓度在2.6×10~9 particles/mL到54.9×10~9 particles/mL范围内时,其浓度和毛细管电泳峰面积的线性良好(R~2=0.998)。方法精密度测试表明其相对标准差小于5%(n=6)。该方法用于定量分析河蚬汤纳米胶粒,操作简单快速,灵敏度高,重现性好。3.建立大鼠腹腔巨噬细胞的毛细管区带电泳分析方法。经过条件优化,最佳细胞分离的条件为:检测波长280 nm,分离电压15 kV,运行缓冲液为含4.6%葡萄糖的20 mmol/L pH=7.4磷酸盐缓冲液。此条件下,巨噬细胞可因其大小形态、表面电荷性质的差异而存在多个电泳迁移时间(出峰个数),且受细胞浓度的影响,细胞浓度越高,迁移时间越长。超声波处理改善细胞分散度可减少细胞浓度对迁移时间的影响。4.毛细管电泳法分析河蚬汤及其纳米胶粒与大鼠腹腔巨噬细胞的相互作用。采用1 mg/mL河蚬汤纳米胶粒作用于巨噬细胞,2 h后巨噬细胞即发生形态分化,24 h后颗粒胞吞量为8.7×10~2 particles/cell,48 h后颗粒胞吞量为2.13×10~3 particles/cell。吞噬河蚬汤纳米胶粒后细胞的迁移时间提前,提示河蚬汤纳米胶粒能够改变巨噬细胞膜电位,增加表面电荷从而改变其电泳迁移速率。同时,毛细管电泳可以高分辨鉴定出河蚬汤与吞噬细胞互作后河蚬汤中原有成分的减少和细胞释放出的新成分。综上可知,毛细管区带电泳可以快速分离天然纳米胶粒并同步完成定量分析,可有效分离巨噬细胞,并可监测巨噬细胞与河蚬汤及其纳米胶粒相互作用过程中的成分与胶粒数量变化,以及巨噬细胞因吞噬纳米胶粒促发的分化,可为检测巨噬细胞受食物成分影响而发生生理状态和功能变化提供一种简便有效的新方法。