论文部分内容阅读
红毛藻(Bangia fusco-purpurea)是我国福建南日岛一种营养价值高且多糖含量丰富的经济养殖海藻。本文系统地研究了红毛藻多糖的提取、分离纯化工艺及其理化性质,并对红毛藻多糖的体外抗氧化活性做了初步的探索。以多糖的提取率与硫酸根含量为指标,比较了热水、冷水、稀酸、稀碱提取红毛藻多糖的效果,发现用热水提取红毛藻多糖提取率与硫酸根含量最高,故选用热水作为提取溶剂。通过单因素与正交实验确定了热水提取的最佳工艺参数为:浸提温度90℃,浸提时间2小时,料液比1:30,浸提次数3次,在此优化的条件下得到多糖提取率为5.97%;采用超声波辅助热水提取红毛藻多糖,通过单因素与正交实验确定了最佳工艺参数为浸提温度为80℃,浸提时间为80 min,料液比1:70,超声波功率200 W,在最佳条件下多糖的提取率为9.69%;用乙醇沉淀多糖时乙醇的最佳终浓度为75%,多糖提取液的最佳浓缩比为1:3,此时的沉淀率为90.77%。用热水提取的红毛藻粗多糖中含有大量的杂蛋白,本文比较了Sevag法、TCA法、中性蛋白酶法及碱性蛋白酶法去除红毛藻粗多糖中的蛋白质,使用这四种脱蛋白方法的脱除率分别为78.50%、56.56%、90.67%和96.77%,多糖的损失率分别为56.50%、10.63%、7.95%、9.80%,可见,酶法脱蛋白的效果好且多糖的损失较少。用阴离子交换柱DEAE Cellulose-52对红毛藻多糖进行分级分离,分别用0 mol/L、0.1 mol/L、0.3 mol/L、0.5 mol/L及2 mol/L的NaCl进行分段梯度洗脱,在盐离子浓度为0.1 mol/L、0.3 mol/L和0.5 mol/L处分别得到三个多糖峰并命名为BPⅠ、BPⅡ和BPⅢ。接着用凝胶过滤柱Sephadex G-100对上述三个组分的多糖继续进行纯化,结果表明,凝胶过滤柱Sephadex G-100可对BPⅠ、BPⅡ和BPⅢ三个多糖组分中的小蛋白有效去除,但BPⅠ中还有一部分蛋白与多糖结合在一起,可能是一种糖蛋白。经紫外光谱分析与冻融分析均表明上述三种多糖为较纯的多糖组分,把Sephadex G-100柱纯化的多糖组分分别命名为BPSⅠ、BPSⅡ和BPSⅢ。测定三种多糖的硫酸根含量,发现BPSⅢ的硫酸根含量最高,其次是BPSⅡ,而BPSⅠ含量最低,且多糖的纯度越高硫酸根含量越高。气相色谱分析结果表明,BPSⅠ、BPSⅡ的单糖组分主要由半乳糖组成,而BPSⅢ除含有半乳糖外还含有少量木糖,其摩尔比为11: 1。分析三种多糖的红外光谱可知三种多糖均含有β-D-半乳糖,硫酸根的位置均在C6位上,BPSⅠ中含有3,6-内醚,BPSⅡ和BPSⅢ不含3,6-内醚。测定红毛藻粗多糖(BP)、BPSⅠ、BPSⅡ和BPSⅢ四种多糖的体外抗氧化活性,结果表明,BP、BPSⅠ、BPSⅡ、BPSⅢ对·OH自由基的半数抑制浓度(IC50)分别为4.98 mg/mL、1.22 mg/mL、13.86 mg/mL和1.78 mg/mL;对DPPH自由基的IC50值分别为0.70 mg/mL、1.05 mg/mL、0.58 mg/mL和0.55 mg/mL;对脂质过氧化体的IC50值分别为5.37 mg/mL、2.83 mg/mL、24.02 mg/mL以及1.60 mg/mL,而对O-2的抑制作用却并不显著。