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目的:microRNA(miRNA)是一类长度为19-25nt进化上保守的小RNA。越来越多的研究表明miRNA参与了各种生命活动。而不同细胞中的miRNA表达量具有显著差异，本研究拟以非小细胞肺癌细胞为模型，探索其中高表达miRNA的生成来源及功能。 方法:以非小细胞肺癌细胞H1299和H460细胞为模型，通过miRNA芯片寻找高表达的miRNA，然后利用qPCR和Northern Blot验证芯片的结果。生物信息学分析miRNA基因定位以及预测miRNA潜在靶标，利用双荧光素酶实验和qPCR来验证miRNA对靶标的靶向作用。 结果:通过H1299细胞和H460细胞miRNA芯片结果分析，我们发现了一系列高表达的miRNA，多数与已经报道的肺癌相关的miRNA相吻合。而其中的miR-4454属于新近发现的miRNA，且目前的测序鉴定发现它只存在人类组织细胞中。我们利用qPCR证实miR-4454在多种细胞高表达，然而进一步的Northern Blot检测发现细胞中并不存在20nt的miR-4454成熟体，却意外发现了大小为70nt左右杂交条带。进一步通过生物素标记的anti-miR-4454探针亲和钓取特异结合小RNA，测序以及生物信息学分析，我们确定了该70nt左右的序列并非miR-4454前体(pre-mir-4454)，而是tRNAHis。tRNAHis3末端具有与miR-4454几乎完全一致的碱基序列，所以导致了芯片和qPCR的假阳性结果。我们进一步实验证明tRNAHis3端可以被miRNA生成途径中的关键因子Dicer酶切割，产生一个16nt小RNA。该16nt的小RNA分子含有类似miR-4454的“种子区”。利用qPCR和双荧光素酶实验证明了这个16nt的小RNA可以发挥类似于miRNA的功能，抑制miR-4454预测靶基因，CNKSR2的表达。 结论:miRNA数据库(miRBase)中包含众多的假miRNA，这些miRNAs只是通过高通量测序和生物信息学获得的，并没有经过严格实验验证。我们首次发现数据库预测的miR-4454在非小细胞肺癌细胞中是不存在的，它是一种来源于tRNAHis3端的Dicer酶切割产生的一种新的16nt小RNA，这种tRNA来源的小RNA能够发挥类似于miRNA的功能。