【摘 要】
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我国是食用番茄和加工番茄的生产、消费大国,在加工番茄中含有大量不饱和脂肪酸的番茄籽油是高营养油料的来源。研究发现硬脂酰酰基载体蛋白去饱和酶(Stearoyl-acyl carrier protein desaturase,SAD)在大豆、拟南芥、水稻等物种中都参与了脂肪酸变化的调控过程,但在番茄中对该酶的研究鲜有报道。本研究通过对番茄SAD家族进行生物学信息和组织表达模式分析,筛选得到了一个在果实
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我国是食用番茄和加工番茄的生产、消费大国,在加工番茄中含有大量不饱和脂肪酸的番茄籽油是高营养油料的来源。研究发现硬脂酰酰基载体蛋白去饱和酶(Stearoyl-acyl carrier protein desaturase,SAD)在大豆、拟南芥、水稻等物种中都参与了脂肪酸变化的调控过程,但在番茄中对该酶的研究鲜有报道。本研究通过对番茄SAD家族进行生物学信息和组织表达模式分析,筛选得到了一个在果实中特异表达的基因SlSAD8。通过CRISPR/Cas9突变体技术获得了SlSAD8突变体植株,并探究SlSAD8参与的番茄品质形成相关的生物学功能。论文主要研究结果如下:(1)番茄SAD家族共有9个成员,分别是Sl SAD1-Sl SAD9,其中SlSAD8在果实及种子中特异性表达,且在Br+3时表达量最高。SlSAD8基因位于番茄六号染色体上,全长1261bp,含有两个外显子和一个内含子。通过进化树和蛋白质结构预测,我们发现SlSAD8与蓖麻Rc SAD1、大豆Gm SAD8亲缘性较高。亚细胞定位结果显示,SlSAD8蛋白定位于叶绿体和细胞核中;(2)通过构建SlSAD8-Cas9载体,并进行番茄遗传转化,获得SlSAD8的敲除突变体株系。通过测定WT和突变体株系果实样品中SAD酶活,验证了构建的SlSAD8-Cas9载体在转入番茄植株后确实起到编辑的作用,突变体植株中SAD酶活明显低于野生型。通过果实脂肪酸含量测定发现,在SlSAD8敲除的突变体果实和种子中棕榈酸、硬脂酸、亚油酸都显著上升了2-3倍。在sad8-5番茄株系的种子中油酸含量相较于野生型下降了3-4倍,而在sad8-3及sad8-5番茄株系的果实中,油酸含量与野生型相比上升了2-3倍;(3)通过对突变体植株采后果实进行储藏期及抗病性分析,发现sad8-3和sad8-5比WT采后果实失水更慢速率,更耐储藏。且突变体果实通过对水杨酸途径产生影响,对灰霉产生明显的抗性;(4)根据转录组分析发现,S1SAD8基因突变后影响番茄防御、脂肪酸合成等多个生理过程,同时也使叶绿体功能、光合作用功能中的许多基因发生了显著下调。这些差异基因的变化与表型的鉴定一致,这让我们从转录组水平验证了该基因的功能,也为该基因后续的深入研究提供了方向指引。本研究系统分析了番茄SAD家族成员,并初步揭示了番茄SlSAD8基因的功能,相关结果可为增强番茄植株抗病性及提高番茄籽油营养提供重要参考。
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