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研究背景口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是口腔颌面部常见的恶性肿瘤,过去十年其发病率增加了50%,大多发生在40岁以上的男性,严重影响着人类的身心健康与生活质量。大部分的OSCC诊断时即进展至Ⅲ~Ⅳ期,5年生存率仅有53%,为提高患者的生活质量,OSCC的早期诊断尤为重要。口腔黏膜鳞状上皮异常增生的程度越高,则潜在恶性越高,因此明确口腔鳞状上皮重度不典型增生(oral squamous epithelial severe dysplasia,OSESD)、口腔鳞状细胞原位癌(oral squamous cell carcinoma in situ,OSCCIS)、口腔鳞状细胞原位癌伴微浸润(oral squamous cell carcinoma in situ with micro-infiltration,OSCCISM)的诊断与患者的治疗与预后息息相关。近年来,对肿瘤微环境的研究越来越多,对肿瘤微环境的主要成分-肿瘤相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)有关的研究也有了不小收获。它能激活转化生长因子-β以调控角质细胞间的黏附性,亦可分泌广泛的细胞因子,例如生长因子、趋化因子、激素等,使其在肿瘤的生长、转移、浸润及肿瘤引起的炎症反应和免疫逃逸方面都发挥着重要作用,同时CAFs的增加预示着较差的预后。很多研究都认为CAFs是由肿瘤间质中的正常成纤维细胞在受到相关因子的刺激下转变而来,且CAFs表达ɑ-SMA,而正常口腔成纤维细胞(normal oral fibroblasts,NOF)不表达ɑ-SMA,同时CAFs也会表达Connexin 43。从理论上讲,只有当癌变细胞离开原位上皮,开始浸润上皮下纤维组织时,才会使正常纤维组织转化为CAFs。据此,我们推测检测CAFs相关指标,有助于判断癌的早期浸润。本课题收集了口腔黏膜不同类型的鳞状上皮内病变、早期浸润癌及浸润癌,应用免疫组化方法对CAFs因子Connexin 43及ɑ-SMA进行免疫组化单染及双染,从而判断这些指标是否具有协助判断鳞状细胞癌早期浸润的价值。目的应用免疫组化单染及双染方法,分别及联合检测Connexin 43及ɑ-SMA在口腔黏膜不同类型鳞状上皮病变中的表达情况,探讨二者是否具有协助判断鳞状细胞癌早期浸润的价值。材料和方法1.收集郑州大学第一附属医院2011年至2014年住院患者口腔黏膜病变切除标本197例。经病理诊断后,OSESD组织54例,OSCCIS组织58例,OSCCISM/OSCC组织75例,作为对照组的口腔黏膜慢性炎(chronic inflammation of oral mucosa,CIOM)10例。2.应用免疫组化单染及双染检测10例CIOM、54例OSESD、58例OSCCIS、75例OSCCISM/OSCC患者的病理组织中Connexin 43和ɑ-SMA蛋白的表达情况以及Connexin 43及ɑ-SMA蛋白的共同表达情况,分析Connexin 43、ɑ-SMA及其所代表的CAFs与口腔鳞状上皮病变临床病理诊断的关系。3.随访:以电话沟通方式对OSESD及OSCCIS患者进行随访,观察记录患者疾病进展情况。4.统计学处理:采用SPSS21.0统计软件进行数据分析和χ~2检验,P<0.05时认为差异有统计学意义。结果1.Connexin 43单染:在CIOM、OSESD、OSCCIS、OSCCISM/OSCC的间质中,Connexin 43的阳性率分别为10.00%、11.11%、43.10%、61.33%,除CIOM与OSESD之间差异无统计学意义外,其余组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);2.ɑ-SMA与ERG双染:在CIOM、OSESD、OSCCIS、OSCCISM/OSCC的间质中,除外血管区域,ɑ-SMA的阳性率分别为0.00%、9.30%、34.48%、68.00%,除CIOM与OSESD之间差异无统计学意义外,其余组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。3.Connexin 43及ɑ-SMA双染:在CIOM、OSESD、OSCCIS、OSCCISM/OSCC的间质中,CAFs的阳性率分别为10.00%、16.67%、55.17%、85.33%,除CIOM与OSESD之间差异无统计学意义外,其余组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。4.在OSCCISM/OSCC中,可明显观察到浸润癌周边的间质呈CAFs相关因子阳性表达;在OSESD及OSCCIS的随访结果中,间质呈CAFs阳性的患者较CAFs阴性的患者更易进展至OSCC。结论1.本研究验证了Connexin 43及ɑ-SMA所代表的CAFs在口腔黏膜鳞状上皮不同病变程度中的表达有明显差异,CAFs的阳性率随口腔黏膜鳞状上皮病变程度的增加而升高;2.根据对OSESD及OSCCIS病人的随访结果,CAFs的增加是不良的预后指标,提示肿瘤进展的机率增加;3.在判断OSCCIS局部是否有浸润时,若可疑癌周边的间质呈CAFs阳性表达,则更支持浸润癌的诊断,因此Connexin 43及ɑ-SMA对口腔鳞状上皮病变及鳞状细胞癌早期浸润的诊断具有一定的价值。