基于DNA条形码技术的楠属与润楠属木材识别研究

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楠属与润楠属内的木材解剖构造特征非常相似,且两属间部分树种的木材解剖构造特征也很相似,通过传统的木材解剖,依据木材构造特征难以将两个属的木材准确识别出来,本文采用新方法,通过DNA条形码技术识别楠属与润楠属的木材。以楠属中的闽楠、桢楠、紫楠和润楠属中的建润楠、刨花润楠为研究对象,研究了该5种木材的宏观、微观构造特征,同时采用 DNeasy(?)Plant Mini Kit、CTAB-NuClean PlantGen DNA Kit 和SDS-CTAB-NuClean PlantGen DNA Kit分别对该5个树种的新鲜叶片、新鲜木材和经过不同温度干燥处理过的木材进行DNA提取,再通过PCR分别扩增出 matK、trnL-trnF、trnL-intro、ycf3、psbC-trnS、ITS、rpoB、rpoC1等8条DNA条形码序列。研究结果如下:(1)该5种木材均属于散孔材,单管孔及2~4个径列复管孔,导管分子单穿孔及少数复穿孔,管间纹孔式互列,轴向薄壁主要为环管状及环管束状,具分隔木纤维,木射线非叠生,射线组织异形Ⅱ及Ⅲ型,油细胞或黏液细胞丰富。楠属的3种木材和润楠属的2种木材构造特征较相似。(2)采用DNeasy(?)Plant Mini Kit提取叶片和新鲜木材的DNA总浓度的平均值分别为28.69ng/μL、19.29ng/μL,从叶片中提取到DNA的量较高;采用 DNeasy(?)Plant Mini Kit、CTAB-NuClean PlantGen DNA Kit 和SDS-CTAB-NuClean PlantGen DNA Kit这三种方法提取新鲜木材的DNA浓度总平均值分别为 19.29ng/μL、39.79ng/μL、40.95ng/μL,DNeasy(?)Plant Mini Kit提取的DNA浓度最低,另外两种方法提取的DNA浓度比较接近,浓度大约是DNeasy(?)Plant Mini Kit提取的两倍。三种方法提取的DNA均可满足后续PCR扩增的要求。(3)采用30℃、70℃、103℃这三个不同温度对5种木材进行干燥处理,干燥温度越高,从木材中提取到DNA浓度越低,木材DNA降解程度越高。采用 DNeasy(?)Plant Mini Kit、CTAB-NuClean PlantGen DNA Kit 和SDS-CTAB-NuClean PlantGen DNA Kit这三种方法分别提取经不同温度干燥处理的木材DNA,其质量和数量均可以满足PCR扩增的要求。(4)通过分析8个DNA条形码的测序结果,发现trnL-trnF、ITS、rpoB这3个条形码能将楠属和润楠属区分开;条形码matK和trnL-intro可将建润楠和刨花润楠进行区分鉴定;条形码ycf3可将桢楠、建润楠、刨花润楠进行区分鉴定;条形码psbC-trnS可将紫楠单独鉴别出来;条形码rpoC1在几种楠木之间无碱基差异。结合ycf3、psbC-trnS这2个DNA条形码,即可将闽楠、桢楠、紫楠、建润楠、刨花润楠逐一鉴别出来。本研究通过DNA条形码技术成功将闽楠、桢楠、紫楠、建润楠、刨花润楠的木材准确的区分,找出了能区分该5种木材的DNA条形码,为楠属与润楠属木材准确识别提供科学、准确的方法。
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