牛结核病(Bovine tuberculosis)主要是由牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)引起,在多种组织器官形成干酪样坏死、肉芽肿(结核结节)和钙化结节病变的一种人畜共患慢性传染病,世界动物卫生组织(OIE)把牛结核病列为B类动物疫病。本研究对13头结核菌素皮试疑似牛进行了细菌培养,经抗酸染色,发现3例抗酸阳性菌。将培养的草分枝杆菌高压灭菌后经过超声波粉碎处理,取上清获得的草分枝杆菌吸收抗原,用以吸收待检血清中的非特异性抗体,排除了ELISA反应中的部分交叉反应的干扰。建立的ELISA对60头牛进行结核诊断,阳性检出率为8.3%(5/60),比没有经过草分支杆菌吸附的血清ELISA诊断牛结核结果阳性率下降了10%,取得了较好的效果。将制备的兔抗草分枝杆菌抗体与溴化氰活化的琼脂糖偶联,得到了亲和层析PPD抗原。亲和层析PPD抗原运用于牛γ-干扰素ELISA检测,排除了其他杂菌的干扰。ELISA诊断结果与牛γ-干扰素ELISA检测的敏感性为100%(4/4),特异性为72.7%(8/11),符合率为80%(12/15)。试验通过比对牛结核菌素皮试(TST)、细菌分离培养与抗酸染色试验、ELISA试验和牛γ-干扰素ELISA诊断牛结核的试验结果,发现牛γ-干扰素ELISA检测法与草吸抗原处理的PPD-ELISA’检测法都能有效的排除假阳性的干扰,相对于传统的细菌培养抗酸染色和TST法检测,其敏感性、特异性都有了很大的提升。亲和层析纯化的PPD抗原用于牛γ-干扰素ELISA,能够排除牛结核杆菌和环境分枝杆菌同时感染所带来的误判,具有很大的开发潜力和应用前景。