盐酸克伦特罗（Clenbuterol Hydrochloride,CL）属于β2型肾上腺素受体激动剂,常被作为违禁添加剂添加在动物饲料中,通过食物链直接危害人体健康,因此,畜产品中CL残留的快速检测对食品安全具有重要意义。纳米抗体具有敏感性高、稳定性好、筛选周期短等优点,在食品安全检测、生物医药等领域中具有良好的发展前景。本研究旨在构建基于噬菌体展示的天然纳米抗体文库,初步筛选靶向盐酸克伦特罗的纳米抗体,为后续抗盐酸克伦特罗纳米抗体生物学活性研究以及建立新的优化体系检测CL残留奠定基础,也为筛选与其他抗原结合的纳米抗体提供了技术和物质基础。本实验通过分离羊驼外周血淋巴细胞,提取总RNA,反转录成cDNA后,PCR扩增羊驼重链可变区基因,将其克隆至pCANTAB 5E噬菌粒载体中,电转化至TG1感受态细胞,经辅助噬菌体M13K07侵染,构建基于噬菌体展示的天然纳米抗体库。采用重氮化法制备完全抗原CL-BSA和CL-OVA,以制备CL完全抗原为靶抗原对天然纳米抗体库进行4轮富集淘选,将鉴定后的阳性克隆抗体基因克隆至pET22b载体中诱导表达,并对其进行初步鉴定。经文库质量鉴定,VHH基因插入率约为90%,抗体文库库容约1.3×107cfu/mL,经辅助噬菌体M13K07侵染,噬菌体文库滴度约8.1×1012pfu/mL,满足后续筛选需求。经SDS-PAGE凝胶电泳及紫外光谱扫描的方法鉴定,成功制备CL完全抗原。经4轮富集淘选,阳性噬菌体克隆鉴定结果显示,获得一株大小为378 bp,编码126个氨基酸的N8抗体。经ExPASy在线预测分析N8的理化性质,显示其为稳定、亲水性蛋白。诱导表达产物经SDS-PAGE及Western blotting特性鉴定,结果显示,表达的蛋白分子量大小为18 KDa且能靶向识别CL。综上所述,本研究成功构建了库容约1.3×107cfu/mL的天然纳米抗体文库,并从中淘选出一株与CL特异性结合的纳米抗体。为后续纳米抗体改造及CL残留检测奠定基础。