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[目的]:本研究主要目的是:1.研究b FGF单抗联合紫杉醇(Taxol)抑制MCF-7细胞增殖,诱导细胞凋亡的分子机制;2.探讨b FGF单抗联合Taxol对耐药株MCF-7/Taxol的增效作用的分子机制。[方法]:制备腹水型b FGF单抗,体外培养MCF-7细胞和乳腺癌耐紫杉醇的耐药株MCF-7/Taxol,实验中将两种细胞均分为四组,Control组、b FGF单抗组、Taxol组及b FGF单抗+Taxol组处理,并用相应的药物对细胞进行处理。(1)用CCK-8法检测b FGF单抗联合Taxol对MCF-7,MCF-7/Taxol细胞的增殖抑制率,比较四组间的细胞增殖抑制率。(2)使用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染检测MCF-7,MCF-7/Taxol细胞在不同药物组处理下的细胞凋亡的情况。(3)使用Western blot检测与MCF-7和MCF-7/Taxol增殖,凋亡相关信号通路蛋白的表达变化用以揭示b FGF单抗联合Taxol抑制MCF-7的分子机制以及对于MCF-7/Taxol的增效作用。用Western blot检测了蛋白Raf-1,Erk,p-Erk,JNK,p-JNK,STAT3,p-STAT3,Caspase3,cleaved-Caspase3,PARP,cleave-PARP,Bax,Bcl的表达变化。[结果]:(1)CCK-8实验结果显示b FGF单抗联合Taxol作用MCF-7,MCF-7/Taxol后对其增殖抑制率分别提高了13.40%-36.50%;9.56%-26.87%,联合用药能增强对细胞抑制作用。(2)流式结果显示b FGF单抗联合Taxol作用MCF-7,MCF-7/Taxol后PI,FITC双阳性率分别提高了17.10%-23.20%;20.00%-22.70%,表明联合能增强对凋亡促进作用。(3)Western Blot结果显示MCF-7,MCF-7/Taxol中Mab D9+Taxol组能明显下调Raf-1,p-Erk,p-STAT3,Bcl-2,Caspase3,并上调p-JNK,Bax,cleaved Caspase3,cleaved PARP,其中Raf-1在MCF-7/Taxol中表达量较MCF-7明显下降。[结论]:(1)b FGF单抗联合Taxol作用MCF-7,MCF-7/Taxol后对其增殖抑制率分别提高了13.40%-36.50%;9.56%-26.87%,联合用药能增强对细胞抑制作用。结果显示b FGF单抗联合Taxol作用MCF-7,MCF-7/Taxol后PI,FITC双阳性率分别提高了17.10%-23.20%;20.00%-22.70%,表明联合能增强对凋亡促进作用。(2)本研究揭示了b FGF单抗联合Taxol抑制MCF-7的如下机制:加强了对Erk/MAPK通路的抑制,并加强上调p-JNK,下调p-STAT3的表达量,引起Bcl-2表达量下调,Bax表达上调,Caspase3,cleaved Caspase3,cleaved PARP表达变化引起细胞凋亡。(3)b FGF单抗联合Taxol抑制MCF-7紫杉醇耐药株(MCF-7/Taxol)增效作用的分子机制与作用于亲本株的机制基本一致,同样是抑制Erk/MAPK通路,并上调p-JNK,下调p-STAT3的表达量,引起Bcl-2表达量下调,Bax表达上调,Caspase3,cleaved-Caspase3,cleaved-PARP表达变化引起细胞凋亡,b FGF单抗,Taxol分别单独作用MCF-7/Taxol时不能引起该机制。且根据实验结果发现Raf-1在MCF-7/Taxol的表达量较MCF-7相比明显降低,Raf-1很有可能与MCF-7/Taxol耐紫杉醇的耐药机制有关。