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1.目的:研究冠心病痰浊证脂蛋白代谢的调控机制,检测对PCSK9/LDLR和oxLDL/LOX-1通路的相关指标,观察在冠心病患者与健康人之间、痰浊证患者与非痰浊证患者之间的差异,为冠心病痰浊证患者的临床诊断提供更多的生物学证据,同时通过对HDL、LDL的亚型构成比和水平的测定为冠心病痰浊证的诊断提供参考。2.方法:2.1冠心病及冠心病痰浊证患者血清PCSK9、LRP1、oxLDL、LOX-1、HSP27水平及外周血单核细胞LRP1表达水平的研究方法纳入2016年9月至2017年1月中国中医科学院广安门医院心血管科的冠心病住院治疗患者131例,将同期广安门医院的30例健康体检者作为对照,并按照中医辨证将冠心病患者分为痰浊证组和非痰浊证组。抽取所有受试者清晨空腹静脉血,运用ELISA法测定血清PCSK9、LRP1、oxLDL、LOX-1、HSP27水平,并运用RT-PCR技术测定PBMC中LRP1 mRNA含量,观察在冠心病患者与健康人之间、痰浊证与非痰浊证之间上述指标的情况。2.2冠心病及冠心病痰浊证患者血浆HDL、LDL亚型及血清sdLDL水平的研究方法纳入2016年9月至2017年1月中国中医科学院广安门医院心血管科的冠心病住院治疗患者69例,将同期广安门医院的22例健康体检者作为对照,并按照中医辨证将冠心病患者分为痰浊证组和非痰浊证组。使用脂蛋白分类检测系统(lipoprint system)对血浆中的HDL、LDL的亚群分布和水平进行检测,运用ELISA技术对血清sdLDL进行检测。观察在冠心病患者与健康人之间、痰浊证与非痰浊证之间上述指标的情况。2.3统计分析采用spss20.0统计软件进行统计学处理。计量资料以均数±标准差(x±s)描述。组间比较符合正态分布时用t检验;符合正态分布且满足方差齐性时采用方差检验;非正态分布时采用非参数检验。计数资料以频数、构成比描述,组间比较采用卡方检验。3.结果:3.1冠心病患者血清PCSK9、LRP1、oxLDL、LOX-1、HSP27水平及外周血单核细胞LRP1表达水平的结果3.1.1冠心病患者血脂水平结果两组生化常规血脂比较,与健康组相比,冠心病组TC升高(3.96±1.03 mmol/L vs 3.49±0.65 mmol/L;p<0.05);TG、LDL-C、VLDL 升高(TG:1.46±0.78 mmol/L vs 1.00±0.27 mmol/L;LDL-C:2.77±0.87 mmol/L vs 2.33±0.52 mmol/L;VLDL:0.67±0.42 mmol/L vs 0.45±0.13 mmol/L;p<0.01);HDL-C 降低(1.03±0.27 mmol/L vs 1.23 ± 0.21 mmol/L;p<0.01)。3.1.2 冠心病患者血清 PCSK9、LRP1、oxLDL、LOX-1、HSP27 水平结果:两组人员血清检测指标比较,与健康组相比,冠心病组LRP1、oxLDL升高(LRP1:305.64±38.18 pg/ml vs 284.15±37.36 pg/ml;oxLDL:293.71±43.57 pg/ml vs 271.92±39.12 pg/ml;p<0.05),HSP27 降低(164.04±16.78 ng/ml vs 175.72±19.42 n//ml p<0.05);PCSK9、LOX-1升高(PCSK9:207.71539.9.87ng/ml 176.13122.15 ng/ml;LOX-1:301.67±39.46 pg/ml vs 264.82±25.77 pg/ml;p<0.01)。3.1.3冠心病患者PBMC LRP1 mRNA表达水平结果:两组人员外周血单核细胞比较,与健康组相比,冠心病组LRP1 mRNA下降,呈极显著差异(P<0.01)。3.2冠心病痰浊证患者血清PCSK9、LRP1、oxLDL、LOX-1、HSP27水平及外周血单核细胞LRP1表达水平的结果3.2.1冠心病痰浊证患者血脂水平结果两组生化常规血脂比较,与非痰浊证相比,痰浊证组LDL-C、ApoB升高(LDL-C:3.00±0.86 mmol/L vs 2.55±0.83 mmol/L;ApoB:0.77±0.18 g/L vs 0.68±0.17 g/L;p<0.05)。3.2.2冠心病痰浊证患者血清PCSK9、LRP1、oxLDL、LOX-1、HSP27水平结果:两组血清指标比较,与非痰浊证组相比,痰浊证组LRP1、LOX-1升高(LRP1:315.16±34.86 pg/ml vs 295.68±39.22 pg/ml;LOX-1:311.89±41.86 pg/ml vs 290.98±33.93 pg/ml;p<0.05);HSP27 降低(160.48±15.27 ng/ml vs 167.77±17.58 ng/ml;p<0.05);PCSK9、oxLDL 升高(PCSK9:224.27±41.32 ng/ml vs 189.87±29.68 ng/ml;oxLDL:306.15±41.15 pg/ml vs 280.34±42.28 pg/ml;p<0.01)。3.2.3冠心病痰浊证患者PBMC LRP1 mRNA表达水平结果:两组人员外周血单核细胞比较,与非痰浊证组相比,痰浊证组LRP1 mRNA下降,呈显著差异(P<0.05)。3.3冠心病患者血浆HDL、LDL亚型及血清sdLDL水平的结果3.3.1冠心病患者高密度脂蛋白亚型构成比结果:两组高密度脂蛋白亚型分布比较,与健康组相比,冠心病组HDL1%、HDL4%降低(HDL1%:9.39±5.74 vs 14.50±8.40;HDL4%:12.33±2.38 vs 13.81±3.24;p<0.05);HDL2%、HDL3%、Large(1-3)%降低(HDL2%:16.11±5.76 vs 23.39±6.28;HDL3%:10.44±4.30 vs 13.94±3.57;Large(1-3)%:35.94±11.81 vs 51.84±11.02;p<0.01);HDL6%、HDL7%、HDL8%、HDL9%、HDL10%、Intermediate(4-7)%、Small(8-10)%升高(HDL6%:18.70±4.67 vs 13.04±3.32;HDL7%:5.90±2.11 vs 2.72±1.94;HDL8%:6.12±2.60 vs 2.26±2.61;HDL9%:4.12±2.08 vs 1.28±1.67;HDL10%:2.65±2.31 vs 0.91±1.31;Intermediate(4-7)%:51.00±7.60 vs 43.18±8.54;Small(8-10):12.89±6.17vs4.45±5.12;p<0.01)。3.3.2冠心病患者高密度脂蛋白亚型水平结果:两组高密度脂蛋白亚型水平比较,与健康组相比,冠心病组HDL1、HDL3、HDL4降低(HDL1:4.61±3.54 mg/dl vs 7.05±4.30 mg/dl;HDL3:5.03±2.80 mg/d 1 vs 6.95±2.34 mg/dl;HDL4:5.72±2.20 mg/dl vs 6.64±1.59 mg/dl;p<0.05);H DL2、Large(1-3)降低(HDL2:7.75±4.10 mg/dl vs 11.55±3.86 mg/dl;Large(1-3):17.32±9.03 mg/dl vs 25.32±7.54 mg/dl;p<0.01);HDL6、HDL7、HDL8、HDL9、HDL10、Small(8-10)升高(HDL6:8.38±2.12 mg/dl vs 6.50±2.20 mg/dl;HDL7:2.58±0.90 mg/dl vs 1.55±0.91 mg/dl;HDL8:2.71±1.15 mg/dl vs 1.23±1.38 mg/dl;HDL9:1.74±0.83 mg/dl vs 0.73±0.94 mg/dl;HDL10:1.16±0.90 mg/dl vs 0.50±0.74 mg/dl;Small(8-10):5.64±2.38 mg/dl vs 2.45±2.72 mg/d 1;p<0.01)。3.3.3冠心病患者与健康人低密度脂蛋白亚型构成比结果:两组低密度脂蛋白亚型分布比较,与健康组相比,冠心病组LDL1%降低(14.37±3.85 vs 17.4±4.76;p<0.05);LDL3%、LDL4%、LDL5%升高(LDL3:5.12±2.96 vs 1.67±2.13;LDL4:1.64±2.59 vs 0.09±0.41;LDL5:0.25±0.66 vs 0;p<0.01)。3.3.4冠心病患者与健康人低密度脂蛋白亚型水平及平均LDL颗粒大小结果:两组低密度脂蛋白亚型水平比较,与健康组相比,冠心病组LDL2、LDL3、LDL4、LDL5 升高(LDL2:21.74±8.68 mg/dl vs 15.73±6.22 mg/dl;LDL3:8.70±5.43 mg/dl vs 2.27±2.85 mg/dl;LDL4:2.78±4.62 mg/dl vs 0.09±0.43 mg/dl;LDL5:0.46±1.35 mg/dl vs 0 mg/dl;p<0.01);平均 LDL 颗粒大小降低(263.65±5.31 mg/dl vs 269.05±3.75 mg/dl;p<0.01)。3.3.5冠心病患者与健康人血清sdLDL水平结果:两组血清sdLDL水平比较,与健康组相比,冠心病组升高(15.11 ±1.89 nmol/ml vs 14.16±2.00 nmol/ml;p<0.05)。3.4冠心病痰浊证患者血浆HDL、LDL亚型及血清sdLDL水平的结果3.4.1冠心病痰浊证患者高密度脂蛋白亚型构成比结果:两组高密度脂蛋白亚型百分数比较,与非痰浊证组相比,痰浊证组HDL2%、HDL3%、HDL4%、Large(1-3)%降低(HDL2%:14.19±4.62 vs 18.21±6.20;H DL3%:8.77±4.18 vs 12.26±3.70;HDL4%:11.35±2.54 vs 13.39±1.67;Large(1-3)%:31.60±10.19 vs 40.70±11.75;p<0.01);Intermediate(4-7)%升高(53.08±6.33 vs 48.74±8.30;p<0.05);HDL6%、HDL7%、HDL8%、HDL9%、Small(8-10)%升高(HDL6%:20.42±3.87 vs 16.82±4.79;HDL7%:6.86±1.95 vs 4.85±1.78;HDL8%:7.24±2.52 vs 4.89±2.10;HDL9%:4.88±2.09 vs 3.28±1.74;Small(8-10)%:15.19±6.40 vs 10.38±4.86;p<0.01)。3.4.2冠心病痰浊证患者高密度脂蛋白亚型水平结果:两组高密度脂蛋白亚型水平比较,与非痰浊证组相比,痰浊证组HDL2、H DL3；HDL4、Large(1-3)降低(HDL2:6.33±3.48 mg/dl vs 9.30±4.20 mg/dl;HDL3:3.92±2.56 mg/dl vs 6.24±2.57 mg/dl;HDL4:4.86±2.03 mg/dl vs 6.67±2.01 mg/dl;Large(1-3):14.08±8.08 mg/dl vs 20.85±8.79 mg/dl;p<0.01);HD L8、Small(8-10)升高(HDL8:3.03±1.08 mg/dl vs 2.36±1.14 mg/dl;Smal1(8-10):6.19±2.41 mg/dl vs 5.03±2.21 mg/dl;p<0.05)。3.4.3冠心病痰浊证患者低密度脂蛋白亚型构成比结果:两组低密度脂蛋白亚型百分数比较,与非痰浊证组相比,痰浊证组LDL1%降低(13.19±3.51 vs 15.65±3.84;p<0.01);LDL3%、LDL4%、LDL5%升高(LDL3%:6.43±2.97 vs 3.70±2.22;LDL4%:2.76±3.13 vs 0.43±0.77;LDL5%:0.48±0.86 vs 0;p<0.01)。3.4.4冠心病痰浊证患者低密度脂蛋白亚型水平及平均LDL颗粒大小结果:两组低密度脂蛋白亚型水平比较,与非痰浊证组相比,痰浊证组平均LDL颗粒大小降低(261.25±5.87 mg/dl vs 266.27±2.94 mg/dl;p<0.01);LDL3、LDL 4、LDL5升高(LDL3:11.36±5.57 mg/dl vs 5.79±3.47 mg/dl;LDL4:4.78±5.63 mg/dl vs 0.61 ± 1.14 mg/d1;LDL5:0.89±1.77 mg/d1 vs 0 mg/d1;p<0.01)。3.4.5冠心病痰浊证患者血清sdLDL水平结果:两组血清sdLDL水平比较,与非痰浊证组相比,痰浊证组升高(15.56±2.31 n mol/ml vs 14.62±1.13 nmol/ml;p<0.05)。4.结论:4.1冠心病患者血清PCSK9、LRP1、oxLDL、LOX-1水平升高,HSP27水平下降,PBMC中LRP1 mRNA表达下调,提示通过对PCSK9/LDLR和oxLDL/LOX-1通路调控LDL-C、VLDL水平,即通过炎症和氧化应激形成胆固醇积累,导致冠心病的形成。4.2冠心病痰浊证血清PCSK9、LRP1、oxLDL、LOX-1水平升高,HSP27水平下降,PBMC中LRP1 mRNA表达下调,提示通过PCSK9/LDLR和oxLDL/LO X-1通路对LDL-C、apoB的调节参与痰浊证的形成。4.3冠心病患者HDL构成比和实际水平中大颗粒降低、小颗粒升高,小颗粒LDL(LDL3-7%)、血清sdLDL升高,平均LDL颗粒大小降低,提示小颗粒HDL、LDL参与冠心病形成,大颗粒HDL对冠心病可能存在保护作用。4.4冠心病痰浊证患者HDL构成比和实际水平中大颗粒降低、小颗粒升高,小颗粒LDL(LDL3-7%)、血清sdLDL升高,平均LDL颗粒大小降低,提示小颗粒的HDL、LDL参与冠心病痰浊证的形成,大颗粒HDL对痰浊证可能存在保护作用。