羊胎盘中SOD提取条件及小分子肽的分离纯化研究

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目的:   胎盘(Placenta)又名“紫河车”为常用中药,民间常将其煮烂食之。传统中医理论认为胎盘性甘、咸、归肺、肝、肾经,功能为补气、养血、益精,可用作滋补、养颜、强壮之药。现代医学研究证明:胎盘除含有多种免疫球蛋白、活性肽之外,还含有干扰素、激素、磷脂和多种多糖等。从八十年代开始,我国许多学者便开始从健康产妇的胎盘中提取一种小分子活性物质即胎盘活性因子或称胎盘肽,经研究证明胎盘肽对机体有增强抵抗力和免疫力的作用。研究家畜胎盘肽的主要目的是将家畜胎盘中丰富的生物活性肽传递给动物或人,以增强动物或人体的生物功能,从而探索出一种充分利用动物胎盘的新型免疫调节剂。本实验从羊胎盘中分离SOD及小分子肽,为以后的新型药品研发奠定了一定的基础。   方法:   自然界真核生物中SOD绝大部分为Cu-Zn SOD,其分子量为32KDa左右,故本实验利用超滤方法,将羊胎盘截留为30KDa-100KDa分子量片段,首先将30KDa-100KDa的分子片段通过改变温度、孵育时间和Cu2+-Zn2+浓度来检测SOD活性的变化,从而选择比较好的条件来提取羊胎盘中的SOD。本实验还将上述30KDa-100KDa分子量片段利用层析纯化和双酶水解的方法得到我们所需要的目的片段小分子肽,并对这两部分小分子肽进行测序。   结果:   利用超滤方法截留羊胎盘提取液30KDa-100KDa,通过改变温度、孵育时间、Cu2+-Zn2+浓度选取最适条件来提取羊胎盘SOD。还利用层析纯化的方法获得了两段小分子肽片段,并对其成分进行鉴定。经实验发现,温度为68℃、孵育时间为10min及Cu2+-Zn2+在浓度为0.0002%时,SOD同工酶谱显示此段截留的羊胎盘样品具有三种同工酶,分别为55KDa、32KDa、17KDa,其中55KDa SOD活性最高,并得到其粗提物为3g。实验中还对两种检测SOD的活性方法进行了比较,发现邻苯三酚法对粗酶中SOD的活性测定更为准确。本实验还成功获得了两段小分子肽段分别为酪蛋白和辅酶一部分。   结论:   本实验优化了羊胎盘中SOD提取条件,实验发现羊胎盘具有三种SOD同工酶其中55KDa SOD活性最高,其次为32KDa,17KDa,经聚乙二醇6000萃取得到其粗提物为3g。实验中还对两种检测SOD的活性方法进行了比较,发现邻苯三酚法对粗酶中SOD的活性测定更为准确,为以后粗酶SOD活性的准确测定提供依据。本实验成功获得了两段小分子肽段,为以后新型药品的研发奠定了一定的基础。
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