H102与干细胞合用对AD小鼠脑内凋亡相关蛋白的影响

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目的:通过观察H102和hUCMSC各自及其联合对APP转基因鼠行为学、脑细胞凋亡的影响,深入研究H102和hUCMSC对阿尔茨海默病(Alzheimers disease,AD)的治疗作用及可能的作用机制。方法:1. hUCMSC的分离、培养、检测、Dil荧光标记与移植。2.H102和hUCMSC对AD小鼠行为学和脑内凋亡蛋白的影响。将AD小鼠随机分为模型组、hUCMSC2周组、H102组、hUCMSC4周组、H102+hUCMSC组,并设同月龄同背景C57BL/6J小鼠为正常对照组。H102组和H102+hUCMSC组侧脑室注射H102(80μmol/L)3μl/d连续4周,对照组和模型组侧脑室注射等体积生理盐水。hUCMSC2周组,hUCMSC4周组,H102+hUCMSC组只在注射开始的第二天侧脑室注射hUCMSC,3μl/只(5×105/μl)。应用Morris水迷宫检测AD小鼠的空间参考记忆的变化。利用免疫组织化学方法和Western blot方法测定Bad、Bax、Bcl-2、Bcl-xl的表达。结果:1. hUCMSC在培养过程中大量扩增,荧光标记后,显微镜观察显红色荧光,细胞标记率为90%,且分布均匀。2.H102和hUCMSC对AD小鼠动物模型行为学及细胞凋亡的作用。2.1AD小鼠学习记忆能力的检测,采用Morris水迷宫测试。(1)定位航行实验结果:模型组小鼠较正常组逃避潜伏期延长,差异有统计学意义(P<0.01),hUCMSC2周组小鼠逃避潜伏期较模型组小鼠略有缩短,但差异无统计学意义(P>0.05),较正常组明显延长,差异有统计学意义(P<0.01);hUCMSC4周组小鼠逃避潜伏期较模型组有明显的缩短,差异有统计学意义(P<0.01),但仍较正常组延长,且差异有统计学意义(P<0.01)。H102组、H102+hUCMSC组小鼠逃避潜伏期均较模型组有明显的缩短,差异有统计学意义(P<0.01),和正常组相差无几,差异无统计学意义(P>0.05)。H102+hUCMSC组较H102组逃避潜伏期略有缩短,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)空间探索实验结果:模型组小鼠较正常组第三象限停留时间缩短,差异有统计学意义(P<0.01),hUCMSC2周组与模型组相比,第三象停留时间略有延长,差异均无统计学意义(P>0.05),与正常组相比第三象限停留时间仍明显缩短,差异均有统计学意义(P<0.01);hUCMSC4周组与模型组相比,第三象限停留时间明显延长,差异有统计学意义(P<0.01),但仍明显短于正常组,差异有统计学意义(P<0.01);H102组、H102+hUCMSC组第三象限停留时间与模型组相比明显延长,差异均有统计学意义(P<0.01),与正常组相差无几,差异均无统计学意义(P>0.05); H102+hUCMSC组与H102组相比,第三象限停留时间有所延长,但差异无统计学意义(P>0.05)。2.2hUCMSC和H102对AD小鼠脑细胞凋亡的影响(1) Bad、Bax免疫组化染色:模型组小鼠较正常组Bad, Bax增多,差异有统计学意义(P<0.01),hUCMSC4周组较模型组含量减少,差异有统计学意义(P<0.01),仍比正常组含量多,差异有统计学意义(P<0.01);H102注射组、H102+hUCMSC纠,皮层及海马CA3区阳性细胞均较模型组明显减少,差异有统计学意义(P<0.01),而与正常组相比差异无统计学意义(P>0.05),H102+hUCMSC组与H102组相比,阳性细胞略减少,但差异无统计学意义(P>0.05)。Bcl-2, Bcl-xl免疫组化染色:模型组小鼠脑内Bcl-2, Bcl-xl阳性细胞较正常组小鼠明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。hUCMSC4周组较模型组含量增多,差异有统计学意义(P<0.01),仍比正常组含量少,差异有统计学意义(P<0.01);H102注射组、H102+hUCMSC组,皮层及海马CA3区阳性细胞较模型组均明显增多,差异有统计学意义(P<0.01),而与正常组相比差异无统计学意义(P>0.05);H102+hUCMSC组与H102组相比,阳性细胞略增多,但差异无统计学意义(P>0.05)。(2) Western blot检测:模型组小鼠较正常组Bad, Bax增多,差异有统计学意义(P<0.01),Bcl-2减少,差距有统计学意义(P<0.01),H102注射组,H102+hUCMSC组Bad、Bax蛋白含量较模型组明显减少(P<0.01),较正常组差异无统计学意义(P>0.05)。模型组小鼠脑内Bcl-2蛋白含量较正常组小鼠减少,差异有统计学意义(P<0.01)。H102组,H102+hUCMSC小鼠Bcl-2含量较模型组增多,差异有统计学意义(P<0.01),与正常组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:H102是一种有开发前景的药物,能改善小鼠认知功能。hUCMSC移植的治疗作用较弱,方法有待改进。
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